Cell Total RNA Isolation Kit Total RNA Isolation Purification Kits gikan sa cell
Deskripsyon sa Kit:
Ang labi ka putli ug taas nga kalidad nga kinatibuk-ang RNA makuha gikan sa lainlaing mga kultura nga mga selula sa 11 minuto.
RNase-Libre
Naglihok sa temperatura sa kwarto (15-25 ℃)
Uban sa DNA-Cleaning Column
Taas nga ani sa RNA
Paspas: Tapuson ang pagkuha sa 11 ka minuto
Kaluwasan: Walay Organikong kemikal
Deskripsyon
Kini nga kit naggamit sa spin column ug pormula nga gihimo sa Foregene, nga epektibo nga makakuha sa taas nga kaputli ug taas nga kalidad nga kinatibuk-ang RNA gikan sa mga selula nga gikulto sa 96, 24, 12, ug 6-well plate.
Ang kit naghatag ug episyente nga DNA-Cleaning Column, nga daling makabulag sa supernatant ug cell lysate, makagapos ug makatangtang sa genomic DNA.Ang operasyon yano ug makadaginot sa panahon.
Tang RNA-only Column makahimo sa pagbugkos sa RNA sa usa ka talagsaon nga pormula.Ang usa ka dako nga gidaghanon sa mga sample mahimong maproseso nga dungan.
Mga sangkap sa kit
| Komposisyon sa kit | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer cRL1* | 25 mL | 100 mL |
| Buffer cRL2 | 15 mL | 60 mL |
| Buffer RW1* | 25 mL | 100 mL |
| Buffer RW2 | 24 mL | 96 mL |
| RNase-Free ddH2O | 10 mL | 40 mL |
| RNA-Only Column | 50 | 200 |
| Kolum sa Paglimpyo sa DNA | 50 | 200 |
| Instruksyon | 1 | 1 |
*Palihug pagsul-ob og gwantis ug paghimo og mga paagi sa pagpanalipod sa panahon sa operasyon tungod kay ang Buffer cRL1 ug Buffer RW1 adunay irritating chaotropic salts.
Mga bahin ug bentaha
■ Ang tibuok nga proseso gipadagan sa temperatura sa lawak (15-25 ℃), nga walay ice bath ug ubos nga temperatura nga centrifugation.
■ Ang tibuok kit kay RNase-Free, dili kinahanglan nga mabalaka mahitungod sa RNA degradation.
■ Ang DNA-Cleaning Column espesipikong nagbugkos sa DNA, aron ang kit makatangtang sa genomic DNA nga kontaminasyon nga walay dugang nga DNase.
■ Taas nga abot sa RNA: RNA-only Column ug talagsaon nga pormula makalimpyo sa RNA.
■ Kusog nga tulin: dali nga operahan ug mahimong makompleto sa 11 ka minuto.
■ Kaluwasan: Walay gikinahanglan nga organikong reagent.
■ Taas nga kalidad: Ang giputli nga RNA adunay taas nga kaputli, wala’y protina ug uban pang mga hugaw, ug mahimong makasugat sa lainlaing mga sunod-sunod nga eksperimento.
Aplikasyon sa kit
Kini angayan alang sa pagkuha ug pagputli sa kinatibuk-ang RNA gikan sa kultura nga mga selula sa 96, 24, 12, ug 6-maayong mga palid.
Daloy sa trabaho
Diagram
Ang agarose gel battery diagram sa Cell Total RNA Isolation Kit nagtratar sa ibabaw sa lain-laing mga numero sa mga selula, 20μl volume elution, pagkuha 2μl giputli total RNA 1%.
Pagtipig ug estante sa kinabuhi
Ang kit mahimong tipigan sulod sa 12 ka bulan sa temperatura sa lawak (15–25 ℃) o 2–8 ℃ sa mas taas nga panahon (24 ka bulan).
Ang buffer cRL1 mahimong tipigan sa 4 ℃ sulod sa 1 ka bulan human sa pagdugang sa 2-hydroxy-1-ethanethiol(opsyonal).
Wala makuha ang RNA o ubos ang abot sa RNA
Kasagaran adunay lainlaing mga hinungdan nga makaapekto sa pagkaayo sa pagkaayo, sama sa: sulud sa sample sa tisyu sa RNA, pamaagi sa operasyon, gidaghanon sa elution, ug uban pa.
1. Ice bath o cryogenic (4 °C) centrifugation gihimo atol sa operasyon.
Rekomendasyon: Pag-operate sa temperatura sa lawak (15-25 ° C) sa tibuok proseso, ayawg ice bath ug centrifuge sa ubos nga temperatura.
2. Dili husto nga pagpreserbar sa sample o sobra nga oras sa pagtipig sa sample.
Rekomendasyon: Tipigi ang mga sample sa -80 °C o i-freeze sa liquid nitrogen ug likayi ang balikbalik nga paggamit sa freeze-thaw;sulayi ang paggamit sa presko nga tisyu o kultura nga mga selula alang sa pagkuha sa RNA.
3. Dili igo nga sample lysis.
Rekomendasyon: Kung mag-homogenize sa tisyu, siguroha nga ang tisyu igo nga homogenized ug ang mga selula sa tisyu igo nga nabahin aron ipasabut ang pagpagawas sa RNA.
4. Ang eluent wala gidugang sa husto.
Rekomendasyon: Kumpirma nga RNase-Free ddH2Ang O gidugang dropwise sa tunga-tunga sa purification column membrane.
5. Ang husto nga gidaghanon sa hingpit nga ethanol wala gidugang sa Buffer RL2 o Buffer RW2.
Rekomendasyon: Sunda ang mga instruksyon, idugang ang saktong gidaghanon sa absolute ethanol sa Buffer RL2 ug Buffer RW2 ug isagol og maayo sa dili pa gamiton ang kit.
6. Ang sample nga dosis sa tissue dili angay.
Rekomendasyon: Paggamit og 10-20 mg nga tissue o (1-5) × 106mga selula kada 500 μl buffer RL1, tungod kay ang sobra nga paggamit sa tissue mahimong moresulta sa pagkunhod sa RNA extraction.
7. Dili husto nga elution volume o dili kompleto nga elution.
Rekomendasyon: Ang gidaghanon sa elution sa kolum sa pagputli mao ang 50-200 μl;kung ang epekto sa elution dili makatagbaw, girekomenda nga i-extend ang oras sa pagbutang sa temperatura sa kwarto pagkahuman idugang ang preheated RNase-Free ddH2O, pananglitan sa 5-10 min.
8.Ang purification column adunay ethanol residue human sa Buffer RW2 nga paghugas.
Rekomendasyon: Kung adunay residue sa ethanol human sa paghugas sa Buffer RW2, walay sulod nga tube centrifugation alang sa 1min, ang oras alang sa walay sulod nga tube centrifugation operation mahimong madugangan ngadto sa 2min, o ang purification column mahimong ibutang sa temperatura sa lawak sulod sa 5 min aron igong makuha ang nahabilin nga ethanol.
Ang giputli nga RNA nadaot
Ang kalidad sa giputli nga RNA adunay kalabotan sa mga hinungdan sama sa pagpreserbar sa sample, kontaminasyon sa RNase, ug pagmaniobra, ug uban pa.
1. Ang mga sample sa tisyu wala gitipigan sa oras.
Rekomendasyon: Kung ang mga sample sa tisyu o mga selula dili gamiton sa tukma sa panahon nga paagi human sa pagkolekta, diha-diha dayon cryopreserve sa -80 °C o liquid nitrogen.Aron makuha ang RNA, gamita ang bag-ong gikuha nga tissue o cell sample kung mahimo.
2. Gibalikbalik nga freeze-thawing sa tissue samples.
Rekomendasyon: Sa pagtipig sa mga sample sa tisyu, labing maayo nga putlon kini ngadto sa gagmay nga mga piraso alang sa pagpreserba, ug kuhaa ang usa sa mga piraso kung gamiton kini aron malikayan ang balik-balik nga freeze-thawing sa sample ug ang pagkadaut sa RNA.
3. Ang RNase gipaila o wala magsul-ob og disposable gloves, mask, ug uban pa atol sa operasyon.
Rekomendasyon: Ang mga eksperimento sa pagkuha sa RNA labing maayo nga gihimo sa separado nga mga lawak sa pagmaniobra sa RNA ug ang lamesa gilimpyohan sa wala pa ang eksperimento.
Pagsul-ob ug disposable nga gwantes ug maskara sa panahon sa eksperimento aron mamenosan ang pagkadaot sa RNA tungod sa pagpaila sa RNase.
4. Reagents kontaminado sa RNase sa panahon sa paggamit.
Rekomendasyon: Ilisan ug bag-ong Animal Total RNA Isolation Kit para sa may kalabutan nga mga eksperimento.
5. Ang centrifuge tubes, mga tip, ug uban pa nga gigamit sa RNA manipulation kay kontaminado sa RNase.
Rekomendasyon: Kumpirma nga ang centrifuge tubes, tip, pipettes, ug uban pa nga gigamit sa RNA extraction kay RNase-Free.
Ang giputli nga nakuha nga RNA makaapekto sa mga eksperimento sa ubos
RNA giputli pinaagi sa pagputli kolum, kon ang asin ions, protina sulod mao ang dako kaayo nga makaapekto sa downstream eksperimento, sama sa: reverse transcription, Northern Blot et al.
1. Ang elutioned RNA adunay salt ion residues.
Rekomendasyon: Kumpirma nga ang saktong gidaghanon sa ethanol gidugang sa Buffer RW2 ug paghimo sa 2 ka paghugas sa kolum sa pagputli sa centrifugal speed nga gipakita alang sa operasyon;kung adunay nahabilin nga asin nga ion, ibilin ang kolum sa pagputli sa Buffer RW2 sulod sa 5 min sa temperatura sa kwarto ug ipahigayon ang centrifugation aron mapadako ang pagtangtang sa kontaminasyon sa asin.
2. Ethanol residue sa elutioned RNA.
Rekomendasyon: Kumpirma nga human sa paghugas sa buffer RW2, himoa ang walay sulod nga tube centrifugation nga operasyon sa centrifugation speed nga gipakita alang sa operasyon, dugangi ang oras sa walay sulod nga tube centrifugation operation ngadto sa 2 min kung adunay nahabilin nga ethanol, o ibilin kini sa temperatura sa lawak sulod sa 5 m
