Ang direktang PCR usa ka reaksyon nga direkta nga naggamit sa mga tisyu sa hayop o tanum alang sa pagpadako nga wala’y pagkuha sa nucleic acid.Sa daghang mga paagi, ang direkta nga PCR molihok sama sa naandan nga PCR

Ang nag-unang kalainan mao ang naandan nga buffer nga gigamit sa direkta nga PCR, ang sample mahimong direkta nga ipailalom sa reaksyon sa PCR nga wala’y pagkuha sa nucleic acid, apan adunay mga katugbang nga kinahanglanon alang sa pagtugot sa mga enzyme ug ang pagkaangay sa buffer nga nalambigit sa direkta nga reaksyon sa PCR.

Bisan kung adunay daghan o dili kaayo PCR inhibitor sa kasagaran nga mga sample, ang direkta nga PCR mahimo gihapon nga makab-ot ang kasaligan nga pagpadako sa ilawom sa aksyon sa mga enzyme ug buffer.Ang tradisyonal nga reaksyon sa PCR nanginahanglan taas nga kalidad nga nucleic acid ingon usa ka template, nga makapugong sa hapsay nga pag-uswag sa reaksyon sa PCR kung ang template adunay mga protina ug uban pang mga hugaw.Ang Direct PCR sa pagkakaron maoy usa sa mas popular nga mga teknolohiya sa natad sa molekular nga diagnostics.

01 Ang Direct PCR kay orihinal nga gigamit para sa mananap ug tanom

Ang labing una nga aplikasyon sa direkta nga PCR naa sa natad sa mga hayop ug tanum, sama sa dugo, tisyu ug buhok sa ilaga, iring, manok, koneho, karnero, baka, ug uban pa, dahon sa tanum ug liso, ug uban pa, gigamit sa pagtuon sa genotyping, transgenic, plasmid detection, Gene knockout analysis, DNA source identification, species identification, SNP analysis ug uban pang field analysis.

Kini nga mga umahan adunay pipila ka kasagaran nga mga bahin, nga mao, ang target nga gene content medyo taas ug ang nucleic acid extraction masamok, mao nga ang direkta nga PCR dili lamang makadaginot sa oras ug adunay gamay nga epekto sa mga resulta, apan makaluwas usab sa gasto.

Ang direkta nga PCR nga gigamit alang sa pagtuki sa pathogen usa ka butang sa bag-ohay nga mga tuig, ang pipila nga mga tiggama sa PCR reagent naghimo og daghang mga paningkamot sa kini nga direksyon kung maghimo kabag-ohan.Ilabi na niining epidemya sa COVID-19, daghang mga produkto sa pag-detect ang nagpakita sa merkado, sama sa SARS-CoV-2 Nucleic Acid Detection Kit (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) nga gi-research ug gi-develop sa Foregene, nga naggamit sa Real-time nga RT PCR nga teknolohiya (rRT-PCR) para sa qualitative detection sa SARS-CoV-2 o nasropharyngeal nga sample sa nucleic acid sa tawo.

Ang Foregene usa sa mga kompanya nga naggamit sa Direct PCR nga teknolohiya, alang sa pag-ila sa normal nga ORF1ab, N, E, uglaing lineages nucleic acids sa human nasopharyngeal o oropharyngeal swab samples sama sa SARS-CoV-2 B.1.1.7 lineage (UK), B.1.351 lineage (ZA), B.1.617 lineage (IND) ug P.1 lineage (BR).

02  Reagents gikinahanglan alang sa direkta nga PCR

Sample nga Lysate

Ang sample lysate mahimong ma-configure sa imong kaugalingon o mapalit.Ang kalainan sa komposisyon sa lainlaing mga tatak sa lysate maghimo nga lahi ang abilidad sa pag-lysing, ug unya ang oras sa pag-lysing mahimong gamay nga lahi.Pananglitan, alang sa pag-andam sa mga sample sa tisyu sa hayop, ang 30 minuto o tibuok gabii nga lysis kasagarang girekomenda, ug ang solusyon sa lysis alang sa mga virus gikan sa 3-10 ka minuto.

PCR master mix

Girekomenda nga gamiton ang mainit nga pagsugod nga DNA polymerase aron mapalambo ang piho nga pagpadako ug pagdugang sa abilidad sa pagpadako.Ang kinauyokan sa direkta nga PCR usa ka kaayo nga matugoton nga polymerase.

Pagwagtang o pagpugong sa mga sangkap sa sample nga makaapekto sa pagpadako sa DNA

Human maproseso ang sample gamit ang lysate, ang mga protina, lipid ug uban pang mga cell debris ipagawas, kini nga mga substansiya makapugong sa PCR reaction.Busa, ang direkta nga PCR nanginahanglan pagdugang sa katugbang nga pagtangtang o mga inhibitor aron makunhuran ang impluwensya niini nga mga hinungdan.

03  Usa ka koleksyon sa lima ka mga punto sa kahibalo sa direkta nga PCR

Una, ang Direct PCR nga teknolohiya kay direkta nga PCR nga teknolohiya para sa nagkalain-laing biological sample.Ubos niini nga teknikal nga kahimtang, dili na kinahanglan sa pagbulag ug pagkuha sa nucleic acid, direkta nga gamiton ang tissue sample ingon nga butang, ug idugang ang target gene primers mao ang sa pagbuhat sa PCR reaksyon.

Ikaduha, ang Direct PCR nga teknolohiya dili lamang usa ka tradisyonal nga DNA template amplification technology, apan naglakip usab sa RNA template reverse transcription PCR.

Ikatulo, ang Direct PCR nga teknolohiya dili lamang direkta nga naghimo sa naandan nga qualitative PCR nga mga reaksyon sa mga sample sa tisyu, apan naglakip usab sa Real-Time nga qPCR nga mga reaksyon, nga nagkinahanglan sa sistema sa reaksyon nga adunay lig-on nga anti-background nga fluorescence interference capability ug endogenous fluorescence quenchers ang antagonistic nga abilidad.

Ikaupat, ang mga sample nga gitumong sa Direct PCR nga teknolohiya nagkinahanglan lamang sa pagpagawas sa nucleic acid templates, ug dili tangtangon ang mga protina, polysaccharides, salt ions, ug uban pa nga makabalda sa PCR reaction.Nga nanginahanglan sa nucleic acid polymerase ug PCR Mix sa reaksyon nga sistema nga adunay maayo kaayo nga pagsukol ug pagpahiangay aron masiguro ang kalihokan sa enzyme ug katukma sa pagkopya sa ilawom sa komplikado nga mga kahimtang.

Ikalima, ang sample sa tisyu nga gipunting sa teknolohiya sa Direct PCR nga wala’y bisan unsang pagtambal sa pagpaayo sa nucleic acid ug ang kantidad sa template gamay ra, nga nanginahanglan nga ang sistema sa reaksyon adunay labi ka taas nga pagkasensitibo ug pagkaayo sa pagpadako.