Daghang mga rebolusyonaryong imbensyon sa kasaysayan sa teknolohiya sa pagtuki sa akong hunahuna mao ang immunolabeling nga teknolohiya base sa prinsipyo sa antigen-antibody specific binding, PCR technology ug sequencing technology.Karon maghisgot kita bahin sa teknolohiya sa PCR.Sumala sa ebolusyon sa teknolohiya sa PCR, ang mga tawo kanunay nga nagbahin sa teknolohiya sa PCR sa tulo ka henerasyon: ordinaryo nga teknolohiya sa PCR, real-time nga fluorescent quantitative PCR nga teknolohiya ug digital PCR nga teknolohiya.
Common PCR nga teknik
KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)
Si Kary Mullis nag-imbento sa polymerase chain reaction (polymerase chain reaction , PCR) niadtong 1983. Giingon nga sa dihang nagdrayb siya sa iyang uyab, kalit lang siyang nadasig ug nakahunahuna sa prinsipyo sa PCR (sa kaayohan sa pagdrayb).Si Kary Mullis gihatagan ug Nobel Prize sa Chemistry niadtong 1993. Ang New York Times mikomento: "Taas nga orihinal ug mahinungdanon, halos nagbahin sa biology ngadto sa pre-PCR ug post-PCR nga mga panahon.
Ang prinsipyo sa PCR: Ubos sa catalysis sa DNA polymerase, ang mother strand DNA gigamit ingon nga template, ug ang piho nga primer gigamit ingon nga sinugdanan sa extension, ug ang anak nga babaye nga strand DNA nga komplementaryo sa mother strand template DNA gikopya sa vitro pinaagi sa denaturation, annealing, extension ug uban pang mga lakang.Kini usa ka teknolohiya sa pagpadako sa DNA synthesis in vitro, nga dali ug espesipikong makapadako sa bisan unsang target nga DNA sa vitro.
Mga bentaha sa ordinaryo nga PCR
1.Classic nga pamaagi, kompleto nga internasyonal ug domestic nga mga sumbanan
2.Ubos nga gasto sa mga reagents sa instrumento
3.Ang mga produkto sa PCR mahimong makuha alang sa ubang mga eksperimento sa biology sa molekula
Girekomenda nga Foregene PCR machine: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
May kalabotan nga mga produkto: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Mga disbentaha sa ordinaryo nga PCR
1.dali mahugawan
2.lisud nga operasyon
3.qualitative analysis lamang
4.Kasarangan nga pagkasensitibo
5.Adunay dili piho nga pagpadako, ug kung ang dili piho nga banda parehas ang gidak-on sa target nga banda, dili kini mailhan
CApillary electrophoresis-based PCR
Agig tubag sa mga kakulangan sa ordinaryong PCR, ang pipila nga mga tiggama nagpaila sa mga instrumento base sa prinsipyo sa capillary electrophoresis.Ang lakang sa electrophoresis pagkahuman sa PCR amplification nahuman sa capillary.Ang pagkasensitibo mas taas, ug ang kalainan sa daghang mga base mahimong mailhan ug ang pagpadako mahimong kalkulado sa MAERKER.sulod sa produkto.Ang disbentaha mao nga ang produkto sa PCR kinahanglan pa nga ablihan ug ibutang sa instrumento, ug adunay daghang peligro sa kontaminasyon.
CapillaryElectrophoresis
2. Real-time nga fluorescent quantitative PCR (Quantitative Real-time PCR, qPCR) nga teknolohiyaAng Fluorescent quantitative PCR, gitawag usab nga Real-Time PCR, usa ka bag-ong nucleic acid quantitative nga teknolohiya nga gimugna sa PE (Perkin Elmer) niadtong 1995. Ang kasaysayan sa kalamboan sa fluorescent quantitative PCR maoy usa ka kasaysayan sa makapukaw sa kalag nga pakigbisog sa mga higante sama sa ABI, Roche, ug Bio-Rad.Kung interesado ka, mahimo nimong susihon kini.Kini nga teknik sa pagkakaron mao ang pinakahamtong ug kaylap nga gigamit nga semi-quantitative nga teknik sa PCR.
Girekomenda nga qPCR Machine: https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
Fluorescent dye nga pamaagi (SYBR Green I):Ang SYBR Green I mao ang kasagarang gigamit nga DNA-binding dye para sa quantitative PCR, nga dili espesipikong nagbugkos sa double-stranded nga DNA.Sa libre nga estado, ang SYBR Green nagpagawas sa huyang nga fluorescence, apan sa higayon nga gigapos sa double-stranded nga DNA, ang fluorescence niini motaas ug 1000 ka pilo.Busa, ang kinatibuk-ang fluorescent signal nga gipagawas sa usa ka reaksyon proporsyonal sa gidaghanon sa double-stranded nga DNA nga anaa ug motaas sa pagdugang sa gipadako nga produkto.Tungod kay ang tina nagbugkos nga dili espesipiko sa double-stranded nga DNA, mahimong mamugna ang sayop nga positibong resulta.
May kalabotan nga mga produkto: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
Fluorescent probe pamaagi (Taqman teknolohiya): Atol saAng PCR amplification, usa ka piho nga fluorescent probe ang gidugang dungan sa usa ka parisan sa mga primer.Ang probe usa ka linear oligonucleotide, nga adunay usa ka fluorescent reporter nga grupo ug usa ka fluorescent quencher nga grupo nga gimarkahan sa duha ka tumoy.Sa diha nga ang probe mao ang intact, ang fluorescent signal nga gipagawas sa reporter grupo masuhop sa quencher grupo, ug ang detection Walay fluorescent signal;sa panahon sa PCR amplification (sa yugto sa extension), ang 5'-3' Dicer nga kalihokan sa Taq enzyme makahilis ug makadaut sa probe, aron ang reporter nga fluorescent nga grupo ug ang quencher fluorescent nga grupo mabulag, aron ang fluorescence monitoring system Ang fluorescent signal mahimong madawat, nga mao, sa matag higayon nga ang usa ka kadena sa DNA gipalapad, ang usa ka kompleto nga fluorescent nga molekula ug ang pagkaamgo sa molekula sa DNA mao ang pag-umol pagporma sa mga produkto sa PCR.Ang pamaagi sa pagsusi sa Taqman mao ang labing sagad nga gigamit nga pamaagi sa pagtuki sa klinikal nga pagtuki.
May kalabotan nga mga produkto: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
Mga bentaha sa qPCR
1.Ang pamaagi hinog na ug ang mga kagamitan sa pagsuporta ug mga reagents kompleto
2.Medium nga gasto sa mga reagents
3.sayon gamiton
4.Taas nga pagkasensitibo sa detection ug espesipiko
Mga disbentaha sa qPCR
Ang mutation sa target nga gene mosangput sa wala makit-an.
Ang resulta sa pagkakita sa ubos nga konsentrasyon nga template dili matino.
Adunay usa ka dako nga sayup kung gigamit ang standard curve alang sa quantitative detection.
3. Digital PCR (digital PCR, dPCR) nga teknolohiya
Ang digital PCR usa ka teknik alang sa hingpit nga pag-ihap sa mga molekula sa nucleic acid.Kung itandi sa qPCR, ang digital PCR direkta nga makabasa sa gidaghanon sa mga molekula sa DNA/RNA, nga mao ang hingpit nga pag-ihap sa mga molekula sa nucleic acid sa pagsugod nga sample.Niadtong 1999, pormal nga gisugyot ni Bert Vogelstein ug Kenneth W. Kin-zler ang konsepto sa dPCR.
Kaniadtong 2006, ang Fluidigm ang una nga naghimo usa ka instrumento nga dPCR nga nakabase sa chip nga komersyal.Niadtong 2009, gilusad sa Life Technologies ang OpenArray ug QuantStudio 12K Flex dPCR system.Sa 2013, gilusad sa Life Technologies ang QuantStudio 3DdPCR system, nga naggamit sa high-density nanoscale microfluidic chip nga teknolohiya aron parehas nga maapod-apod ang mga sample sa 20,000 nga indibidwal nga mga selyula.sa maayo nga reaksyon.
Niadtong 2011, gilusad sa Bio-Rad ang droplet-based QX100 dPCR instrument, nga naggamit sa water-in-oil nga teknolohiya aron parehas nga ipang-apod-apod ang sample ngadto sa 20,000 droplet-water-in-oil, ug naggamit ug droplet analyzer aron analisahon ang mga tinulo.Niadtong 2012, gilusad sa RainDance ang instrumento sa RainDrop dPCR, nga gimaneho sa high-pressure nga gas, aron bahinon ang matag standard reaction system ngadto sa usa ka reaction emulsion nga adunay sulod nga 1 ka milyon ngadto sa 10 ka milyon nga picoliter-level micro-droplets.
Sa pagkakaron, ang digital PCR nakaporma ug duha ka dagkong paksyon, tipo sa chip ug tipo sa droplet.Bisan unsa nga matang sa digital PCR, ang kinauyokan nga mga prinsipyo niini mao ang paglimite sa dilution, endpoint PCR ug Poisson distribution.Ang standard nga sistema sa reaksyon sa PCR nga adunay sulud nga mga template sa nucleic acid parehas nga gibahin sa napulo ka libo nga mga reaksyon sa PCR, nga giapod-apod sa mga chips o microdroplets, aron ang matag reaksyon adunay kutob sa mahimo usa ka molekula sa template, ug usa ka molekula nga template nga reaksyon sa PCR ang gihimo.Pinaagi sa pagbasa sa fluorescence Ang presensya o pagkawala sa signal giihap, ug ang hingpit nga quantification gihimo human sa pagkakalibrate sa statistical Poisson distribution.
Ang mosunod mao ang mga kinaiya sa daghang mga digital PCR platform nga akong gigamit:
1. Bio-Rad QX200 droplet digital PCR Bio-RadAng QX200 usa ka klasiko kaayo nga digital PCR nga plataporma, ang sukaranan nga proseso sa pag-ila: 20,000 nga mga sample ang namugna sa droplet generator Ang tubig-sa-lana nga micro-droplets gipakusog sa usa ka ordinaryo nga PCR machine, ug sa katapusan ang fluorescence signal sa matag micro-droplet gibasa sa usa ka micro-droplet reader.Ang operasyon mas komplikado, ug ang risgo sa polusyon medium.
Xinyi TD1 micro-droplet digital PCRAng Xinyi TD1 usa ka domestic digital PCR platform, ang batakang proseso sa pag-ila: makamugna og 30,000-50,000 nga water-in-oil droplets pinaagi sa usa ka droplet generator, amplify sa usa ka komon nga PCR instrument, ug sa katapusan mopasa Ang droplet reader nagbasa sa fluorescent signal sa matag droplet.Ang mga tinulo nga henerasyon ug pagbasa sa kini nga plataporma gihimo sa usa ka gipahinungod nga chip nga adunay gamay nga peligro sa kontaminasyon.
STILLA Naica micro-droplet chip digital PCRAng STILLA Naica kay medyo bag-o nga digital PCR platform.Ang batakang proseso sa pag-ila mao ang: idugang ang solusyon sa reaksyon sa chip, ibutang ang chip sa micro-droplet generation ug amplification system, ug makamugna og 30,000 micro-droplets.Ipakaylap sa chip, ug ang PCR amplification nahuman sa chip.Dayon ang gipadako nga chip gibalhin ngadto sa micro-droplet reading analysis system, ug ang fluorescent signal gibasa pinaagi sa pagkuha og mga hulagway.Tungod kay ang tibuuk nga proseso nahitabo sa usa ka sirado nga chip, ang peligro sa kontaminasyon gamay.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D chip digital PCR
Ang ThermoFisher QuantStudio 3D maoy laing classic nga chip-based digital PCR platform.Ang batakang proseso sa pag-ila niini mao ang: idugang ang solusyon sa reaksyon sa spreader, ug ipakaylap ang solusyon sa reaksyon nga parehas sa chip nga adunay 20,000 microwells pinaagi sa spreader., ibutang ang chip sa PCR machine aron mapadako, ug sa kataposan ibutang ang chip ngadto sa reader ug kuhaan og litrato aron mabasa ang fluorescent signal.Ang operasyon medyo komplikado, ug ang tibuuk nga proseso gihimo sa usa ka sirado nga chip, ug gamay ang peligro sa kontaminasyon.
5. JN MEDSYS Clarity chip digital PCR
Ang JN MEDSYS Clarity usa ka bag-o nga chip-type nga digital PCR platform.Ang sukaranan nga proseso sa pag-ila niini mao ang: idugang ang solusyon sa reaksyon sa aplikator, ug ipakaylap ang solusyon sa reaksyon nga parehas sa 10,000 ka PCR tubes nga gitakda sa PCR tube pinaagi sa aplikator.Sa microporous chip, ang reaksyon nga solusyon mosulod sa chip pinaagi sa capillary action, ug ang PCR tube nga adunay chip gibutang sa PCR machine alang sa pagpadako, ug sa katapusan ang chip gibutang sa magbabasa aron mabasa ang fluorescent signal pinaagi sa pagkuha og litrato.Ang operasyon mas komplikado.Ang risgo sa kontaminasyon gamay ra.
Ang mga parameter sa matag digital PCR nga plataporma gi-summarize ingon sa mosunod:
Ang evaluation indicators sa digital PCR platform mao ang: ang gidaghanon sa split units, ang gidaghanon sa fluorescent channels, ang pagkakomplikado sa operasyon ug ang risgo sa kontaminasyon.Apan ang labing hinungdanon nga butang mao ang katukma sa detection.Usa ka paagi sa pagtimbang-timbang sa mga digital nga PCR platform mao ang paggamit sa daghang digital PCR nga mga plataporma aron mapamatud-an ang usag usa, ug ang laing paagi mao ang paggamit sa standard nga mga substansiya nga adunay tukma nga mga kantidad.
Mga bentaha sa dPCR
1.Pagkab-ot sa hingpit nga quantification
2.Mas taas nga pagkasensitibo ug espesipiko
3.Makamatikod sa ubos nga mga sample sa kopya
Mga disbentaha sa dPCR1. Mahal nga mga ekipo ug mga reagents 2. Kumplikado nga operasyon ug taas nga oras sa pag-ila 3. Pig-ot nga sakup sa pagkakita
Sa pagkakaron, ang tulo ka henerasyon sa teknolohiya sa PCR adunay kaugalingong mga bentaha ug disbentaha, ug ang matag usa adunay kaugalingong mga natad sa aplikasyon, ug dili kini relasyon nga ang usa ka henerasyon mopuli sa lain.Ang padayon nga pag-uswag sa teknolohiya naka-inject ug bag-ong kalagsik sa teknolohiya sa PCR, nga nakapaarang niini sa pag-abli sa sunodsunod nga direksyon sa aplikasyon, nga naghimo sa nucleic acid detection nga mas sayon ug tukma.
Tinubdan: Gidala ka ni Dr. Yuan alang sa pagsulay
Girekomenda nga mga Produkto:
Oras sa pag-post: Nob-18-2022
