Mga awtor: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Unit: Jiaozhou Hospital, Dongfang Hospital Affiliate sa Tongji University

Sa pagkakaron, ang nag-unang sample type alang sa respiratory pathogen nucleic acid detection mao ang throat swab.Adunay daghang mga matang sa kasagarang gigamit nga mga solusyon sa pagpreserbar sa sample, nga ang tanan kinahanglan nga i-refrigerate o i-frozen alang sa transportasyon ug pagtipig;Lisud nga kontrolon ang tibuuk nga proseso sa mubu nga temperatura sa panahon sa proseso sa pagkolekta ug transportasyon, ug lisud nga masiguro ang pagkontrol sa kalidad sa wala pa ang pagsulay sa sample^[1-2].

Ang RNase (RNase) usa ka endonuclease nga nag-hydrolyze sa RNA, nag-una nga nagputol sa phosphodiester bond tali sa mga nucleotide.Ang molekula sa RNase lig-on kaayo, adunay mga disulfide bond sa istruktura, ug ang kalihokan niini wala magkinahanglan sa presensya sa mga divalent cations, mao nga ang RNase dili dali ma-denatured, ug kini dali nga mabag-o bisan human sa taas nga temperatura o paggamit sa mga denaturants.Ang RNases gibahin sa endogenous ug exogenous.Ang endogenous RNases mahimong buhian sa samang higayon kung ang mga selula nabuak.Busa, ang pagwagtang sa papel sa endogenous RNases usa ka kritikal nga lakang sa proseso sa pagkuha sa RNA.Ang mga exogenous nga RNases kaylap nga gipang-apod-apod.Ang mga RNase anaa sa hangin, panit sa tawo, buhok ug laway, nga hinungdanon nga mga hinungdan sa dali nga pagkadaot sa RNA^[3].

Pangutana sa datos

Ang CANS-CL02-A009 "Application of Medical Laboratory Quality and Competency Accreditation Guidelines in the Field of Molecular Diagnosis" sa teknikal nga mga kinahanglanon nagsugyot nga ang angay nga mga sumbanan sa kalidad sa tubig kinahanglan nga maporma sumala sa aplikasyon;Mga disposable nga sudlanan sa hangin:

RNase/Klasipikasyon

(1) RNase A

Ang Ribonuclease A (RNase A), nga nakuha gikan sa bovine pancreas, usa ka endoribonuclease nga espesipikong moatake sa 3′ nga katapusan sa pyrimidine residues sa RNA, pagputol sa cytosine o uracil nga naporma sa kasikbit nga mga nucleotides.Phosphodiester bond, ang kataposang produkto sa reaksyon mao ang 3′ pyrimidine nucleotide ug usa ka oligonucleotide nga adunay 3′ pyrimidine nucleotide sa kataposan.

(2) RNase T1

Ang Ribonuclease T1 (RNase T1) nakuha gikan sa Aspergillus orjzae, kini espesipikong naglihok sa 3′-terminal phosphate sa guanine, ug ang cleavage site anaa sa taliwala sa 3′ phosphate sa guanine ug sa 5′ hydroxyl sa kasikbit nga mga nucleotides.Ang katapusan nga produkto sa reaksyon mao ang 3′guanylic acid ug oligonucleotide nga mga tipik nga adunay 3′guanylic acid sa katapusan.

(3) RNase H

Ang Ribonuclease H (RNase H) unang nadiskobrehan gikan sa tisyu sa calf thymus, ug ang encoding gene niini gi-clone ngadto sa Escherichia coli.Kini espesipikong makadaut sa DNA: RNA strands sa RNA hybrid duplexes, nga moresulta sa oligonucleotides ug mononucleotides nga adunay 3′-OH ug 5′-monophosphate nga mga tumoy, dili kini makapaubos sa single- o double-stranded DNA o RNA.

RNase

Function ug paggamit

Ang Ribonuclease maka-catalyze sa pagkadaot sa ribonucleic acid (RNA) ug mahimong ma-synthesize sa artipisyal nga paagi.Ang tambal nga pahumot gigamit nga topically sa pagtambal sa trauma ug joint pain.Sumala sa mga taho, ang ribonuclease makausab sa metabolismo sa host cell, makapugong sa synthesis sa virus, makapugong sa pagdaghan sa influenza virus in vitro, ug makapugong sa pagporma sa vaccinia ug herpes virus sa mga embryo sa manok.Klinikal nga paggamit sa ribonuclease adlaw-adlaw nga intramuscular indeyksiyon sa 180 mg, mapuslanon sa pagtambal sa epidemya encephalitis, ribonuclease mahimo catalyze sa degradation sa ribonucleic acid (RNA), ug karon artipisyal nga synthesized.Ang tambal nga pahumot gigamit nga topically sa pagtambal sa trauma ug joint pain.Sumala sa mga taho, ang ribonuclease makausab sa metabolismo sa host cell, makapugong sa synthesis sa virus, makapugong sa pagdaghan sa influenza virus in vitro, ug makapugong sa pagporma sa vaccinia ug herpes virus sa mga embryo sa manok.Ang klinikal nga paggamit sa ribonuclease adlaw-adlaw nga intramuscular injection nga 180 mg mapuslanon alang sa pagtambal sa epidemya nga encephalitis.

RNase

Kahulugan sa Inhibitor

Kahubitan sa RNase inhibitor unit: Ang gidaghanon sa enzyme nga gikinahanglan sa pagpugong sa 50% sa kalihokan sa 5ng RNase A usa ka yunit.

Giunsa ang Paglihok sa RNase Inhibitors

Guanidine isothiocyanate:

Ang Guanidine isothiocyanate usa ka organikong compound nga adunay pormula sa molekula C2H6N4S.Nag-una nga gigamit sa biological nga tambal, kemikal nga reagents, ug uban pa Guanidine isothiocyanate mao ang usa ka protina lysing ahente, ug kini sagad gigamit ingon nga ang nag-unang bahin sa lysis solusyon sa molekular diagnostic reagents.Mahimo kining lyse tissue, gub-on ang cell structure ug idissociate ang nucleic acid gikan sa nucleoprotein, ug adunay kusog nga denaturation sa RNase.Kini ang labing epektibo nga inhibitor sa RNase sa pagkakaron.

Ang TRIzol usa ka nobela nga total nga RNA extraction reagent nga direktang makuha ang kinatibuk-ang RNA gikan sa mga selula o tisyu.Naglangkob kini og mga substansiya sama sa phenol ug guanidine isothiocyanate, nga paspas nga makabalda sa mga selula ug makapugong sa mga nucleases nga gipagawas sa mga selula.

(Bisan pa, ang guanidine isothiocyanate delikado alang sa kahimsog sa mga tigdukiduki sa lab.)

RNasin:

Acid glycoprotein nga gikuha gikan sa atay sa ilaga o human blastoderm.Ang Rnasin usa ka non-competitive nga tigpugong sa RNase, nga makagapos sa lainlaing mga RNases aron dili kini aktibo.

(Dugang nga mga detalye: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hig temperatura:

Ang taas nga temperatura usa usab ka sagad nga paagi sa denaturation sa protina.

Diethylpyrocarbonate (DEPC):

Ang DEPC usa ka lig-on apan dili kompleto nga RNase inhibitor, nga makapugong sa kalihokan sa RNase pinaagi sa paghiusa sa amino acid nga imidazole nga singsing sa RNase nga aktibo nga grupo aron ma-denatur ang mga protina.

Vanadyl ribonucleoside complex:

Usa ka komplikado nga naporma sa vanadium oxide ions ug nucleosides, nga nagbugkos sa RNase sa porma sa mga transition substance, nga halos hingpit nga makapugong sa kalihokan sa RNase

uban pa:

Ang SDS, urea, diatomaceous nga yuta, ug uban pa adunay usa ka piho nga epekto sa pagdili sa RNase.

Mga Review sa Eksperto

Li Yujie Chief Technician

Direktor sa Departamento sa Laboratory, Jiaozhou Hospital, Dongfang Hospital nga Naapil sa Tongji University

Aron mapugngan ang biodegradation sa exogenous RNase, ang mga maskara, gwantes ug kalo kinahanglan nga isul-ob ug ilisan kanunay sa panahon sa proseso sa pagkuha sa RNA.Ang tanan nga mga galamiton kinahanglan nga lutoon sa usa ka drying oven sa 200 ° C sulod sa sobra sa 2 ka oras.Ang mga materyales nga gigamit sa pagluto, sama sa plastik, kinahanglang trataron sa tubig sa DEPC, ug dayon hugasan sa distilled water.Ang mga reagents o mga himan nga gigamit alang sa pagkuha, pagpreserba ug pag-ila sa RNA kinahanglan nga ipahinungod sa RNA, ug usa ka independente nga lugar sa operasyon sa RNA kinahanglan nga ipahimutang.

mga pakisayran:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, ug uban pa.Ang mga bakterya ug mga virus sa nasopharynx diha-diha dayon sa wala pa magsugod ang acute lower respiratory infections sa Indigenous Australian nga mga bata[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Hospital Infection Control Branch sa Chinese Preventive Medicine Association.Mga giya alang sa pagkolekta ug pag-inspeksyon sa clinical microbial specimens [J].Intsik nga Journal of Hospital Infection, 2018(20):3192-3200.

[3] "Klinikal nga Pagsulay Napulo ka Libo Ngano nga Molecular Biology Test Volume"