Ang talagsaon nga bahin sa reaksyon sa PCR mao ang dako nga kapasidad sa pagpadako ug hilabihan ka taas nga pagkasensitibo.Aron sa pagpalambo sa PCR performance ug detection efficiency, kita komitado sa pagpalambo sa PCR amplification kapasidad ug detection sensitivity, apan ang labad sa ulo anaa sa proseso sa eksperimento.Ang mga bakak nga positibo kanunay nga mahitabo, ug ang gamay kaayo nga kantidad sa sample nga cross-contamination o kontaminasyon sa produkto sa PCR mahimong hinungdan sa mga sayup nga positibo sa eksperimento.
Lima ka matang sa kontaminasyon sa produkto sa PCR
Adunay daghang mga hinungdan sa kontaminasyon sa PCR, nga mahimong bahinon sa mga musunud nga kategorya:
Ang kontaminasyon sa espesimen nag-una tungod sa kontaminasyon sa sudlanan alang sa pagkolekta sa espesimen, o kung ang espesimen gibutang, kini na-leak gikan sa sudlanan tungod sa loose sealing, o ang specimen gisunod sa gawas sa sudlanan, nga hinungdan sa cross-contamination;Ang kontaminasyon mosangpot sa kontaminasyon tali sa mga espesimen;pipila ka microbial specimens, ilabina ang mga virus, mahimong mokaylap uban sa mga aerosol o maporma nga mga aerosol, nga moresulta sa usag usa nga kontaminasyon.
Ang nag-unang rason mao nga sa panahon sa pag-andam sa PCR reagents, ang sample gun, sudlanan, double distilled water ug uban pang mga solusyon kontaminado sa PCR nucleic acid template.
Sa molecular biology laboratories ug pipila ka laboratoryo nga naggamit ug cloned plasmids isip positibong kontrol, ang problema sa cloned plasmid contamination komon usab.Tungod kay ang sulod sa cloning plasmid sa gidaghanon sa yunit mao ang medyo taas, ug dugang nga mga himan ug mga reagents gikinahanglan sa proseso sa pagputli, ug ang plasmid sa buhi nga mga selula mao ang kaayo lagmit nga kontaminado tungod sa lig-on nga pagtubo ug reproduction abilidad sa buhi nga mga selula.
Ang kontaminasyon sa gipadako nga mga produkto mao ang labing kasagaran nga problema sa kontaminasyon sa mga reaksyon sa PCR.Tungod kay ang gidaghanon sa kopya sa produkto sa PCR dako (kasagaran 1013 ka kopya/ml), nga mas taas pa kay sa limitasyon sa numero sa kopya sa pagkakita sa PCR, ang gamay kaayong gidaghanon sa kontaminasyon sa produkto sa PCR mahimong hinungdan sa sayop nga mga positibo.
Ang polusyon sa aerosol mao ang lagmit nga porma sa kontaminasyon sa mga produkto sa PCR, ug kini usab ang labing dali nga mataligam-an.Naporma kini pinaagi sa friction tali sa liquid surface ug sa hangin.Sa kinatibuk-an, ang kontaminasyon sa aerosol mahimong maporma kung ang tabon giablihan, kung ang sample gi-aspirated, o bisan kung ang reaksyon nga tubo kusog nga giuyog.Sumala sa mga kalkulasyon, ang usa ka partikulo sa aerosol mahimong adunay 48,000 ka kopya, busa ang polusyon nga gipahinabo niini usa ka problema nga angayan nga hatagan ug espesyal nga pagtagad.
Sa partikular, ang mga laboratoryo sa pagsulay kanunay nga naggamit sa parehas nga parisan sa mga primer sa pagsulay sa usa ka piho nga gene.Sa paglabay sa panahon, daghang kontaminasyon sa produkto sa PCR ang mahitabo sa wanang sa laboratoryo.Sa higayon nga mahitabo ang maong kontaminasyon, lisud ang pagwagtang niini sa mubo nga panahon.
Alang sa unang tulo ka matang sa polusyon, mahimo natong gamiton ang epektibong paagi sa paglikay, apan ang polusyon nga gipahinabo sa mga produkto sa PCR lisod pugngan, ilabina sa pagtukod sa dili standard nga PCR laboratories.Sa proseso sa PCR, kung ang tip sa pipette mosuyop ug mohuyop sa likido, ug maablihan ang tabon sa PCR tube, usa ka aerosol ang maporma.Ang mga molekula sa DNA nga gidala sa aerosol (ang usa ka aerosol makadala ug tinagpulo ka libo nga DNA) lisud nga wagtangon tungod kay kini naglutaw sa hangin.Sa diha nga ang sunod nga hugna sa mga eksperimento sa PCR gipaila, ang mga sayup nga positibo mahitabo.
Ingon sa gipakita sa numero sa ubos, ang negatibo nga kontrol nagpadako usab sa katugbang nga banda sa interes:
Ang una nga bahin sa kini nga isyu sa polusyon ug pagpugong sa PCR gipaila dinhi.Ang sunod nga isyu magdala kanimo sa ikaduhang bahin nga "Paglikay sa kontaminasyon sa produkto sa PCR", busa padayon nga tutok!
Panahon sa pag-post: Hul-25-2017
