Ang pagkawala sa pandungog (HL) mao ang labing kasagaran nga sakit sa sensory disability sa mga tawo.Sa mga ugmad nga mga nasud, mga 80% sa mga kaso sa prelingual nga pagkabungol sa mga bata tungod sa genetic nga mga hinungdan.Ang labing komon mao ang single-gene defects (sama sa gipakita sa Fig. 1), 124 gene mutation ang nakit-an nga nalangkit sa nonsyndromic hearing loss sa mga tawo, ang uban tungod sa environmental factors.Ang cochlear implant (usa ka electronic device nga gibutang sa sulod nga dalunggan nga naghatag og electrical stimulation direkta ngadto sa auditory nerve) mao ang labing epektibo nga opsyon sa pagtambal sa grabe nga HL, samtang ang hearing aid (usa ka external electronic device nga nag-convert ug nagpadako sa sound waves) makatabang sa mga Pasyente nga adunay kasarangan nga HL.Bisan pa, sa pagkakaron walay mga tambal nga magamit sa pagtambal sa hereditary HL (GHL).Sa bag-ohay nga mga tuig, ang terapiya sa gene nakadawat og dugang nga pagtagad isip usa ka maayong pamaagi sa pagtambal sa dysfunction sa sulod sa dalunggan.

Fig1.Pag-apod-apod sa matang sa variation nga nalangkit sa pagkabungol.[1]

Bag-ohay lang, ang mga siyentipiko gikan sa Salk Institute ug sa Unibersidad sa Sheffield nagpatik sa usa ka resulta sa panukiduki sa Molecular Therapy - Methods & Clinical Development [2], nga nagpakita sa halapad nga mga prospect sa aplikasyon alang sa in vivo gene therapy sa hereditary deafness.Si Uri Manor, katabang nga propesor sa panukiduki sa Salk Institute ug direktor sa Waitt Center for Advanced Biophotonics, miingon nga natawo siya nga adunay grabe nga pagkawala sa pandungog ug gibati nga ang pagpasig-uli sa pandungog usa ka nindot nga regalo.Ang iyang miaging panukiduki nakit-an nga ang Eps8 usa ka actin regulatory protein nga adunay actin binding ug capping nga mga kalihokan;sa mga selula sa buhok sa cochlear, ang protina nga komplikado nga naporma sa Eps8 nga adunay MYO15A, WHIRLIN, GPSM2 ug GNAI3 nag-una nga anaa sa kadaghanan Ang mga tip sa taas nga stereocilia, nga kauban sa MYO15A nag-localize sa BAIAP2L2 sa mga tip sa mas mubo nga stereocilia, gikinahanglan alang sa pagmentinar sa mga bundle sa buhok.Busa, ang Eps8 mahimong makontrol ang gitas-on sa stereocilia sa mga selula sa buhok, nga gikinahanglan alang sa normal nga pagpaminaw sa function;Ang pagtangtang o mutation sa Eps8 motultol sa mubo nga stereocilia, nga dili makahimo sa hustong pag-convert sa tingog ngadto sa electrical signal alang sa utok nga panglantaw, nga mosangpot sa pagkabungol..Sa parehas nga oras, ang kolaborator nga si Walter Marcotti, usa ka propesor sa Unibersidad sa Sheffield, nakit-an nga ang mga selula sa buhok dili mahimong normal kung wala ang Eps8.Sa kini nga pagtuon, si Manor ug Marcotti nagtinabangay aron imbestigahan kung ang pagdugang sa Eps8 sa mga stereociliary nga mga selula makapasig-uli sa ilang function ug, sa baylo, makapauswag sa pandungog sa mga ilaga.Gigamit sa research team ang adeno-associated virus (AAV) vector nga Anc80L65 aron ihatud ang coding sequence nga adunay wild-type nga EPS8 ngadto sa cochlea sa Eps8-/- bag-ong natawo nga P1-P2 nga mga ilaga pinaagi sa round window membrane injection;sa mga selula sa buhok sa cochlear sa mouse Ang function sa stereocilia giayo sa wala pa sila mohamtong;ug ang epekto sa pag-ayo gihulagway pinaagi sa teknolohiya sa imaging ug pagsukod sa stereocilia.Gipakita sa mga resulta nga gipataas sa Eps8 ang gitas-on sa stereocilia ug gipahiuli ang function sa selula sa buhok sa mga low-frequency nga mga selyula.Nakaplagan usab nila nga, sa paglabay sa panahon, ang mga selula daw nawad-an sa ilang abilidad nga maluwas pinaagi niining gene therapy.Ang implikasyon mao nga kini nga pagtambal mahimo’g kinahanglan nga ipangalagad sa utero, tungod kay ang Eps8-/- nga mga selula sa buhok mahimo’g nahamtong o natipon nga kadaot nga dili na maayo pagkahuman natawo ang mga ilaga."Ang Eps8 usa ka protina nga adunay daghang lainlaing mga gimbuhaton, ug daghan pa ang kinahanglan nga susihon," ingon ni Manor.Ang umaabot nga panukiduki maglakip sa pag-imbestigar sa epekto sa Eps8 gene therapy sa pagpasig-uli sa pandungog sa lain-laing mga yugto sa pag-uswag, ug kung posible ba nga lugwayan ang mga oportunidad sa pagtambal.Sa tinuud, kaniadtong Nobyembre 2020, si Propesor KarenB Avraham sa Tel Aviv University sa Israel nagpatik sa iyang mga resulta sa journal EMBO Molecular Medicine [3], gamit ang usa ka bag-ong teknolohiya sa therapy sa gene aron makamugna usa ka dili makadaot nga sintetikong adeno-associated virus AAV9-PHP.B, Ang depekto sa gene sa mga selula sa buhok sa Syne4-/- nga mga ilaga giayo pinaagi sa pag-inject sa usa ka virus nga nagdala sa coding sequence sa Syne4 ngadto sa sulod nga dalunggan sa mga ilaga, nga nagtugot niini nga mosulod sa mga selula sa buhok ug buhian ang gidala nga genetic nga materyal, nga nagtugot kanila sa pagkahamtong ug pag-obra sa normal (sama sa Fig. 2).

Fig2.Ang eskematiko nga representasyon sa anatomy sa sulod sa dalunggan, nga adunay pagpunting sa organo ni Corti ug ang cellular function sa nesprin-4.

Makita nga ang paggamit sa gene therapy aron makab-ot ang katuyoan sa pagtambal sa mga hereditary nga mga sakit sa lebel sa gene pinaagi sa pagsal-ot, pagtangtang o pagtul-id sa bisan unsang mutated genes alang sa pagtambal (nga mao, pagkontrol sa genetic nga mga pagbag-o sa sakit) adunay taas nga klinikal nga epekto.mga prospect sa aplikasyon.Ang kasamtangan nga mga pamaagi sa gene therapy alang sa genetically deficient nga pagkabungol mahimong bahinon sa mosunod nga mga kategoriya:

pagpuli sa gene

Ang pag-ilis sa gene lagmit mao ang labing “prangka” nga matang sa terapiya sa gene, pinasikad sa pag-ila ug pag-ilis sa depektosong gene sa normal o wild-type nga kopya sa gene.Unang malampuson nga pagtuon sa terapiya sa gene sa sulod sa dalunggan alang sa pagkawala sa pandungog tungod sa pagtangtang sa vesicular glutamate transporter 3 (VGLUT3) gene;AAV1-mediated delivery sa exogenous VGLUT3 overexpression sa inner ear hair cells (IHCs) Mahimong moresulta sa padayon nga pagkaayo sa pandungog, partial ribbon synaptic morphology recovery, ug convulsive nga mga tubag [4].Bisan pa, sa mga pananglitan nga naglakip sa duha ka AAV-delivered gene replacements nga gihulagway sa pasiuna sa ibabaw, importante nga matikdan nga ang mga modelo sa mouse nga gigamit alang sa pipila ka mga matang sa gene deletion hereditary hearing loss disorders temporaryo nga lahi sa mga tawo, ug sa P1 nga mga ilaga , ang sulod nga dalunggan anaa sa hamtong nga yugto sa kalamboan.Sa kasukwahi, ang mga tawo natawo nga adunay hamtong nga pangsulod nga dalunggan.Kini nga kalainan nagpugong sa posible nga paggamit sa mga resulta sa mouse sa pagtambal sa mga hereditary deafness disorder sa tawo gawas kung ang gene therapy gihatag ngadto sa hamtong nga mga dalunggan sa mouse.

Pag-edit sa Gene: CRISPR/Cas9

Kung itandi sa "pagpuli sa gene", ang pag-uswag sa teknolohiya sa pag-edit sa gene nagdala sa kaadlawon sa pagtambal sa genetic nga mga sakit gikan sa gamut.Importante, ang pamaagi sa pag-edit sa gene naglangkob sa mga kakulangan sa tradisyonal nga overexpression nga mga pamaagi sa terapiya sa gene nga dili angay alang sa dominanteng hereditary deafness nga mga sakit, ug ang problema nga ang overexpression nga pamaagi dili magdugay.Human sa espesipikong gipukan sa mga tigdukiduki sa China ang Myo6C442Y mutant allele sa Myo6WT / C442Y nga mga ilaga gamit ang AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2 gene editing system, ug sulod sa 5 ka bulan sa knockout, ang mga ilaga Ang auditory function sa modelo gipahiuli;sa samang higayon, naobserbahan usab nga ang survival rate sa mga selula sa buhok sa sulod nga dalunggan miuswag, ang porma sa cilia nahimong regular, ug ang electrophysiological indicators gitul-id [5].Kini ang una nga pagtuon sa kalibutan nga migamit sa CRISPR/Cas9 nga teknolohiya para sa pagtambal sa hereditary deafness tungod sa Myo6 gene mutation, ug kini usa ka importante nga research progress sa gene editing technology para sa pagtambal sa hereditary deafness.Ang klinikal nga paghubad sa pagtambal naghatag usa ka lig-on nga sukaranan sa siyensya.

Mga pamaagi sa paghatod sa gene therapy

Aron magmalampuson ang therapy sa gene, ang hubo nga mga molekula sa DNA dili makalusot sa mga selyula nga epektibo tungod sa ilang hydrophilicity ug negatibo nga bayad sa mga grupo sa phosphate, ug aron masiguro ang integridad sa mga molekula nga gidugangan sa nucleic acid, usa ka luwas ug epektibo nga pamaagi ang kinahanglan mapili.Ang gidugang nga DNA ipadala ngadto sa target nga selula o tisyu.Ang AAV kaylap nga gigamit isip usa ka sakyanan sa paghatod alang sa pagtambal sa sakit tungod sa taas nga makatakod nga epekto niini, ubos nga immunogenicity, ug lapad nga tropismo sa nagkalain-laing matang sa tisyu.Sa pagkakaron, ang usa ka dako nga pundok sa panukiduki nga trabaho nagtino sa tropismo sa lain-laing mga subtypes sa AAV kalabot sa lain-laing mga matang sa selula sa mouse cochlea.Ang paggamit sa mga kinaiya sa paghatod sa AAV inubanan sa mga tigpasiugda nga espesipiko sa cell mahimong makab-ot ang ekspresyon nga espesipiko sa cell, nga makapakunhod sa mga epekto nga dili target.Dugang pa, isip alternatibo sa tradisyonal nga AAV vectors, ang mga bag-ong sintetikong AAV vectors kanunay nga gipalambo ug nagpakita sa labaw nga abilidad sa transduction sa sulod nga dalunggan, diin ang AAV2/Anc80L65 mao ang labing kaylap nga gigamit.Ang non-viral nga mga pamaagi sa paghatod mahimong dugang nga bahinon sa pisikal nga mga pamaagi (microinjection ug electroporation) ug kemikal nga mga pamaagi (lipid-based, polymer-based, ug gold nanoparticle).Ang duha nga mga pamaagi gigamit sa pagtambal sa mga hereditary deafness disorder ug nagpakita sa lainlaing mga bentaha ug mga limitasyon.Dugang pa sa salakyanan sa paghatud alang sa therapy sa gene ingon usa ka salakyanan, ang lainlaing mga pamaagi alang sa administrasyon sa gene sa vivo mahimong magamit base sa lainlaing mga tipo sa target nga cell, ruta sa administrasyon, ug pagkaepektibo sa pagtambal.Ang makuti nga istruktura sa sulod nga dalunggan nagpalisud sa pagkab-ot sa mga target nga mga selula ug ang pag-apod-apod sa mga ahente sa pag-edit sa genome hinay.Ang membranous labyrinth nahimutang sulod sa bony labyrinth sa temporal bone ug naglakip sa cochlear duct, semicircular duct, utricle, ug balloon.Ang relatibong pagkahimulag niini, gamay nga sirkulasyon sa lymphatic, ug pagkabulag gikan sa dugo pinaagi sa usa ka blood-maze barrier naglimite sa epektibong sistematikong paghatod sa mga therapeutics ngadto sa neonatal nga mga ilaga lamang.Aron makuha ang mga titer sa viral nga angay alang sa therapy sa gene, kinahanglan ang direkta nga lokal nga pag-injection sa mga viral vector sa sulod nga dalunggan.Ang natukod nga mga ruta sa pag-injection naglakip sa [6]: (1) round window membrane (RWM), (2) tracheostomy, (3) endolymphatic o perilymphatic cochleostomy, (4) round window membrane plus Tube fenestration (CF) (sama sa Fig. 3).

Fig3.Inner ear delivery sa gene therapy.

Bisan kung daghang mga pag-uswag ang nahimo sa terapiya sa gene, pinasukad sa mga katuyoan sa paghubad sa klinika, daghang trabaho ang kinahanglan buhaton sa dili pa ang therapy sa gene mahimong usa ka kapilian sa pagtambal sa una nga linya alang sa mga pasyente nga adunay mga sakit nga genetic, labi na sa pagpauswag sa luwas ug epektibo nga mga vectors ug pamaagi sa paghatud.Apan kami nagtuo nga sa umaabot nga umaabot, kini nga mga matang sa pagtambal mahimong usa ka staple sa personalized nga terapiya ug adunay dako nga positibo nga epekto sa kinabuhi sa mga tawo nga adunay genetic disorder ug ilang mga pamilya.

Ang Foregene naglunsad usab og usa ka high-throughput screening kit alang sa mga gipunting nga mga gene, nga paspas ug makahimo og reverse transcription ug mga reaksyon sa qPCR nga walay RNA extraction.

Mga Link sa Produkto

Cell Direct RT-qPCR kit—Taqman/SYBR GREEN I

Para sa dugang nga impormasyon sa produkto, palihog kontaka:

overseas@foregene.com