Tingga

Taas nga non-coding RNA, lncRNA mao ang usa ka non-coding RNA uban sa usa ka gitas-on labaw pa kay sa 200 nucleotides, kasagaran sa taliwala sa 200-100000 nt.Ang lncRNA nag-regulate sa pagpahayag sa gene sa epigenetic, transcription ug post-transcriptional nga lebel, ug miapil sa X chromosome silencing, genome imprinting ug chromatin modification, transcription activation, transcription interference, nuclear transport, cell cycle regulation, cell differentiation regulation, ug dose compensation effects (Dosis many nga may kalabutan nga mga sakit nga importante sa pag-uswag sa mga sakit sa tawo) , ug sa pagkakaron usa sa mga hot spot sa natad sa biomedicine.

01  Mga tipo ug kinaiya sa LncRNA

Ang lncRNA gibahin ngadto sa daghang matang sumala sa lain-laing tinubdan sa pagkaporma niini, sama sa gipakita sa hulagway sa ibabaw.Adunay mosunod nga mga kinaiya:

1. Ang mga lncRNA kasagaran mas taas, nga adunay dinamikong ekspresyon ug lain-laing mga pamaagi sa pagdugtong panahon sa pagkalahi
2. Kon itandi sa coding genes, ang lncRNA kasagaran adunay mas ubos nga lebel sa ekspresyon
3. Kadaghanan sa mga lncRNA adunay klaro nga temporal ug spatial nga ekspresyon nga espesipiko sa proseso sa pagkalainlain ug paglambo sa tisyu
4. Adunay mga kinaiya nga ekspresyon sa mga tumor ug uban pang mga sakit
5. Ang subcellular nga mga lokasyon sa lncRNA lainlain
6. Ang pagkasunod-sunod mao ang ubos sa conservation, apan ang function adunay usa ka matang sa conservation, ug uban pa.

02 Kanunay nga Gipangutana nga mga Pangutana bahin sa LncRNA Reverse Transcription

Tungod sa ubos nga sulud sa lncRNA sa mga selyula, taas nga gitas-on ug taas nga lebel nga istruktura, ang ingon nga RNA kanunay adunay mga komplikado nga istruktura sama sa stem loops o hairpins, ug ang RT-qPCR dali nga adunay mga problema sa dili malampuson nga reverse transcription o ubos nga kahusayan.

03 LncRNA reverse transcription solution

Sa sentro nga lagda, ang proseso sa mga virus sa RNA nga naggamit sa ilang kaugalingon nga reverse transcriptase aron ma-synthesize ang DNA gamit ang RNA ingon usa ka template gitawag nga reverse transcription.Ang proseso sa paggamit sa RNA virus reverse transcriptase aron ma-synthesize ang cDNA template in vitro gitawag nga reverse transcription.Ang mga nag-unang elemento nga gilakip sa reverse transcription system: RNA template, reverse transcriptase, primers ug uban pang mga sangkap.

1. RNA template

Ang impluwensya sa RNA template sa reverse transcription makita sa istruktura, kaputli ug integridad niini.Kung mas taas ang kaputli ug integridad sa gikuha nga RNA, mas taas ang kahusayan sa reverse transcription ug mas tukma ang sunod nga quantitative nga mga resulta.Ang RNA nga giputli sa kasagarang gigamit nga RNA extraction reagents sagad adunay mga residu sa alkohol ug guanidine salts, nga adunay kusog nga pagdili nga epekto sa kadaghanan sa reverse transcriptase.

2. Reverse transcriptase

Ang reverse transcriptase adunay mahinungdanong impluwensya sa tibuok reverse transcription system.Ang angay nga temperatura alang sa reverse transcriptase nga gigamit sa kadaghanan sa mga laboratoryo kasagaran 42°C.Sa tinuud, ang pag-abli sa taas nga lebel sa istruktura sa RNA nanginahanglan mas taas nga temperatura, ug ang mga kinahanglanon alang sa reverse transcriptase mas taas.

3.Primer

Ang reverse transcription primers naglakip sa gene-specific primers, random primers ug Oligo dT primers.Kadaghanan sa mga lncRNA walay polyA nga mga ikog, ug importante nga husto ang pagpares sa mga random nga primer nga adunay Oligo dT.

4.Ubang mga sangkap

Tungod sa kamatuoran nga ang RNA labi ka dali nga madaot, ang pagpaila sa mga sangkap sa reverse transcription system mahimong maminusan, nga epektibo nga makapugong sa pagsulod sa RNase ug masiguro ang hapsay nga pag-uswag sa reverse transcription.

Foregenenakuha gikan sa template sa RNA, gibaliktad ang transkripsyon sa qPCR

Komprehensibo nga escort ang imong lncRNA detection

Animal Total RNA Ipag-inusaraKit (nga adunay kolum sa pagtangtang sa gDNA)

Kinatibuk-ang Cell RNA Ipag-inusaraKit (nga adunay kolum sa pagtangtang sa gDNA)

Lnc-RT HeroTM I(Uban sa gDNase)(Super Premix para sa first-strand cDNA synthesis gikan sa lncRNA)

Tinuod nga Oras nga PCR EasyTM-SYBR Green I

Amga bentaha ofPagkuha sa RNA:

Ang kit naggamit sa ikatulo nga henerasyon nga teknolohiya sa pagkuha sa RNA, dili kinahanglan nga gamiton ang DNase.

11 minutos gikan sa 96, 24, 12, ug 6-well plate cultured cells, high-efficiency extraction sa gDNA-free, high-purity, high-quality total cell RNA.

Mga bentaha sa lncRNA reverse transcription:

Usa ka reverse transcription system nga espesyal nga gihimo alang sa LncRNA aron dali nga makuha ang kontaminasyon sa genomic DNA.

Ang reverse transcription system adunay taas nga thermal stability ug maayo gihapon ang reverse transcription performance sa 50°C.

Ang mga template nga adunay taas nga sulud sa GC ug komplikado nga sekondaryang istruktura mahimong balihon nga adunay taas nga kahusayan.

Bentahaof qPCR:

Ang mainit nga pagsugod sa Foregene Taq Polymerase adunay mas taas nga kahusayan sa amplification, mas taas nga pagkasensitibo sa amplification, ug mas taas nga espesipiko sa amplification

Ang na-optimize nga Real PCR Easy Mix naghimo sa SYBR Green nga ako adunay mas taas nga pagkasensitibo sa detection, ug ang intensity sa fluorescence niini 3-5 ka pilo sa susamang mga produkto, nga makatubag sa mga panginahanglan sa lain-laing matang sa fluorescence quantitative nga mga eksperimento.