Bag-o lang, nadiskobrehan nako ang usa ka butang nga katingalahan!Daghang mga advanced nga mga propesyonal sa eksperimento sa iyang palibot wala gani nahibal-an ang pipila ka sukaranan nga mga punto sa kahibalo sa eksperimento.

Pananglitan, matubag ba nimo ang mosunod nga mga pangutana?

Aduna bay kalainan tali sa OD260 ug A260?Unsay buot ipasabot sa matag usa?
Ang OD mao ang abbreviation sa optical density (optical density), A mao ang abbreviation sa absorbance (absorbance), ang duha ka mga konsepto sa tinuod mao ang sama nga, "optical density" mao ang "absorbance", apan "optical density" mao ang sa linya sa kadaghanan sa nasudnong mga sumbanan ug mas standardized.

Kasagaran atong sukdon ang kantidad sa OD sa 260nm aron makalkulo ang konsentrasyon sa nucleic acid, busa unsa ang girepresentar sa 1OD?
Ang nucleic acid adunay labing taas nga pagsuyup nga peak sa usa ka wavelength nga 260nm, nga adunay duha ka DNA ug RNA, ingon man ang mga tipik sa nucleic acid nga mga tipik (kini ang panguna nga punto).
Ang kantidad sa OD nga gisukod sa usa ka wavelength nga 260 nm natala nga OD260.Kung ang sample lunsay, ang OD260 nga kantidad makakalkula sa konsentrasyon sa sample sa nucleic acid.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (double-stranded DNA)
=37 μg/ml ssDNA (single-stranded DNA)
=40 ug/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (oligonucleotides)
Aduna bay koneksyon ug kalainan tali sa RT-PCR, Realtime-PCR ug QPCR?
Ang RT-PCR mubo alang sa Reverse Transcription PCR
Real Time PCR=qPCR, mubo alang sa Quantitative Real Time PCR
Bisan kung ang Real Time PCR (real-time fluorescent quantitative PCR) ug Reverse Transcription PCR (reverse transcription PCR) parehas nga gipamubo nga RT-PCR.Apan ang internasyonal nga kombensiyon mao ang: Ang RT-PCR espesipikong nagtumong sa reverse transcription PCR.

Unsa ang kasagarang gigamit nga nt, bp, ug kb sa paghulagway sa gitas-on sa DNA/RNA sa biology?
nt = nucleotide
bp = base nga pares base nga pares
kb = kilobase

Siyempre, makaingon ka nga daghang tawo ang wala magtagad niining gagmay nga mga detalye!Ang tanan nagbuhat niini, ug walay mangutana kanimo kon unsa kini.Nahibal-an nimo nga kini wala kinahanglana, di ba?

Dili, Dili, Dili, kinahanglan nga mahibal-an kini!tungod sa unsa?
Tungod kay gusto nimo mag-post usa ka artikulo!Igsoon!Kung nagtinguha ka alang sa gradwasyon o pagpadayon sa mga nahimo sa panukiduki sa siyensya, kinahanglan ka magsalig sa mga artikulo aron isulti!

Ang pagkuha sa nucleic acid kinahanglan mao ang pinakasimple ug pinaka-basic nga eksperimento.Ang kalidad sa pagkuha sa nucleic acid direkta nga nagtino sa mga resulta sa sunod nga mga eksperimento.

Bisag kadaghan na nako gisulti, daghan gihapon ang mga higala nga wala magtagad.Niining higayona nakahukom ko nga mohawa sa artikulo!

Minimum nga Impormasyon alang sa Pagmantala sa Quantitative Real-Time nga mga Eksperimento sa PCR, nga gitawag nga MIQE, usa ka set sa fluorescence quantitative experiment guidelines nga gilusad sa tibuok kalibutan, nga nagsugyot og minimum nga mga sumbanan alang sa eksperimento nga impormasyon nga gikinahanglan alang sa pagtimbang-timbang sa fluorescence quantitative PCR nga mga eksperimento ug pagmantala sa mga artikulo.Pinaagi sa mga kondisyon sa eksperimento ug mga pamaagi sa pagtuki nga gihatag sa eksperimento, ang mga tigrepaso mas makatimbang-timbang sa kabalido sa laraw sa eksperimento sa tigdukiduki.

Makita nga sa seksyon sa pagkuha sa nucleic acid, ang mga mosunud nga mga butang sa pag-ila gisugyot,

Ang "E" nagpaila sa kasayuran nga kinahanglan ihatag ug ang "D" nagpaila sa kasayuran nga kinahanglan ihatag kung kinahanglan.

Ang porma komplikado kaayo, sa pagkatinuod, gusto nakong isulti nga ang tanan kinahanglan nga magsugod gikan sa

kaputli (D), abot (D), integridad (E) ug pagkamakanunayon (E) sa pagtimbang-timbang sa mga nucleic acid niining upat ka aspeto.

Sumala sa mga batasan sa eksperimento, una nga maghisgot bahin sa mga pamaagi sa pagtimbang-timbang sa kaputli ug konsentrasyon.

Ang pagsukod sa OD mao ang paborito ug pinakasayon ​​nga paagi sa pagtuki alang sa mga eksperimento.Bahin sa prinsipyo, dili na ko magdetalye dinhi.Daghang mga laboratoryo karon ang naggamit ug ultra-micro spectrophotometers aron direkta nga maanalisa ang mga sample sa nucleic acid.Samtang gipakita ang kantidad sa pagsuyop, ang programa direkta nga naghatag sa kantidad sa konsentrasyon (nucleic acid, protina ug fluorescent dye) ug mga may kalabutan nga ratios.Sama sa pagtuki sa OD nga kantidad, I-save kini nga litrato ug maayo ka.

Listahan sa solusyon sa kantidad sa universal OD

Bisan pa, adunay pipila ka mga pasidaan nga kinahanglan ipagawas nga gilain alang kanimo.

(Tungod sa tanan, nahibal-an ko nga kinahanglan ka nga magtipig ug maghulat hangtod nga kinahanglan nimo sila!)

Nota 1 Kagamitan

Ang kantidad sa OD maapektuhan sa lainlaing kagamitan.Hangtud nga ang OD260 naa sa usa ka piho nga range, ang mga kantidad sa OD230 ug OD280 makahuluganon.Pananglitan, ang absorbance range sa komon nga Eppendorf D30 sa 260nm mao ang 0 ~ 3A, ug ang NanoDrop One of Thermo anaa sa 260nm.Ang absorbance range sa 0.5 ~ 62.5A.

Nota 2Dilution nga reagent

Ang kantidad sa OD mahimong maapektuhan sa pagtunaw sa lainlaing mga reagents.Pananglitan, ang OD260/280 nga pagbasa sa purified RNA sa pH7.5 10mM Trisbuffer anaa sa taliwala sa 1.9-2.1, samtang saneutral nga tubig nga solusyonang ratio mahimong mas ubos, tingali 1.8-2.0 lamang, apan wala kini magpasabot nga ang kalidad sa RNA nagbag-o sa Kalainan.

Nota 3Mga nahabilin nga sangkap

Ang paglungtad sa nahabilin nga mga sangkap makaapekto sa katukma sa pagsukod sa konsentrasyon sa nucleic acid, mao nga kinahanglan nga likayan ang protina, phenol, polysaccharide ug polyphenol residues sa mga sample sa nucleic acid kutob sa mahimo.

Bisan pa, sa tinuud, ang pagkuha sa mga organikong reagents usa ka karaan nga pamaagi.Sa commercial kits, ang extraction effect mahimong makab-ot pinaagi sa silica-based adsorption column inubanan sa centrifugation, paglikay sa makahilo ug makadaot nga organic reagents nga lisud tangtangon, ug uban pa. Ang problema, sama saAng foregene's nucleic acid extraction kit, wala mogamit sa DNase/RNase ug makahilo nga organic reagents sa tibuok operasyon, paspas ug luwas., ug angepekto kaymaayo(accidentally nakaingon nga upaw to, pero kabalo ko gusto ka makabalo).

Pananglitan 1: Genomic DNA extraction ani ug kaputli

Ang Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) nagtagad sa mga sample sa yuta gikan sa lain-laing mga tinubdan, ug ang gidaghanon ug kaputli sa genomic DNA nga nakuha gipakita sa mosunod nga lamesa:
Pananglitan 2: Tissue RNA extraction ani ug kaputli

Ang Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) nagproseso sa lainlaing mga sample sa tisyu, ug ang gidaghanon ug kaputli sa RNA nga nakuha gipakita sa lamesa sa ubos (para sa tisyu sa mouse):
Bisan pa, ayaw hunahunaa nga nahuman ka sa kantidad sa OD.Aduna ka bay bisan unsa nga nag-atiman sa mahinungdanong mga punto nga akong gidrowing para kanimo sa atubangan?

Matikdi

Ang tipik nga mga molekula sa nucleic acid makalkula usab sa pagsuyop.Sa paghunahuna nga ikaw adunay genomic DNA residues sa RNA, ang imong OD value makita nga taas kaayo, apan ang aktwal nga konsentrasyon sa RNA dili matino.Kung ang imong RNA Dili klaro kung adunay pagkadaot, busa kinahanglan pa namon ang usa ka komprehensibo nga pamaagi sa pagtimbang-timbang aron mahatagan ang usa ka mas tukma nga paghukom, nga mao, ang pagsusi sa integridad sa nucleic acid nga gihisgutan sa MIQE.