Ang RNase usa ka sensitibo nga pulong nga dili gusto madungog sa daghang mga estudyante nga kanunay nga nagpahigayon mga eksperimento sa pagkuha sa RNA.Bug-os nga armado, ang RNA nga sa katapusan nakuha uban sa makahilo nga mga reagents nga phenol ug chloroform nadaot.Wala ako nakig-uli!!!Karon, atong tan-awon ang gigikanan sa bantog nga Rnase.

Ang Ribonuclease (RNase), o RNase, usa ka nuclease nga maka-hydrolyze sa RNA ngadto sa gagmay nga mga molekula.Ang RNase, isip usa ka gamay nga molekula nga protina, talagsaon nga lig-on .Ang naandan nga taas nga temperatura ug taas nga presyur nga sterilization sa singaw ug mga inhibitor sa protina dili mahimo nga hingpit nga ma-aktibo kini.Ang kalig-on sa RNase nag-una gikan sa disulfide bonds sa istruktura.Pananglitan, ang kasagarang gigamit nga RNase sa bovine pancreas adunay 124 lamang ka amino acid, apan adunay 4 ka disulfide bond.Ang sulfur bond ug disulfide bond naghatag sa RNase nga adunay maayo kaayo nga thermal stability.Dugang pa, ang rnase adunay medyo gamay nga gibug-aton sa molekula ug dali nga mapasig-uli ang orihinal nga porma niini sa daghang mga kaso.

Dugang pa sa hilabihan ka lig-on,Ang RNases kay naa sa tanang dapit sa laboratoryo .Ang RNase usa ka biolohikal nga mekanismo sa depensa.Alang sa usa ka selula, ang exogenous RNA sagad makamatay.Kon itandi sa exogenous DNA, ang exogenous RNA kasagaran mas delikado.Ang RNA malipayong gi-transcribe ug gihubad, mao nga halos tanang organismo nag-evolve sa RNases aron depensahan batok sa pagsulong sa exogenous RNA.Busa, ang mga selula sa bakterya nga gitikad sa laboratoryo ug ikaw nga nagkuha sa RNA nagpagawas sa kahumot sa RNase.Ang mga likido sa lawas sa tawo (laway, luha, ug uban pa) adunay daghang RNase, busa ayaw paghilak kung ang RNA nadaot.Kon mas mohilak ka, mas grabe ang pagkadaot sa RNA!!Si Sister Daiyu dili angay alang sa pagkuha sa RNA!

Dugang pa, ang imong delikado nga panit adunay daghang RNase, ug ang mga marker, pipette, mga pultahan sa refrigerator, ug mga gunitanan sa pultahan nga nahikap sa panit adunay usab RNase.

Sa kadaghang rambling, atong tan-awon kon unsaon pag-atubang sa RNases.

Ang una nga butang nga gihunahuna sa tanan kung gikuha ang RNADEPC(diethyl pyrocarbonate).Ang DEPC nag-una nga nagdenature sa protina pinaagi sa paghiusa sa imidazole nga singsing sa RNase nga aktibo nga grupo nga histidine, sa ingon nagpugong sa kalihokan sa enzyme.Ang 0.1% nga DEPC mahimong adunay mas maayo nga pagtangtang nga epekto sa Rnase, apan kinahanglan natong hatagan ug pagtagad nga ang DEPC usa ka nailhan nga carcinogen, busa ang espesyal nga pagtagad kinahanglan ibayad sa paggamit niini.

Alang sa RNase, kinahanglan naton magsugod gikan sa duha ka aspeto,ang una mao ang pagpugong sa kalihokan sa endogenous RNase

Ang mga conventional RNA extraction reagents sama sa guanidine isothiocyanate ug DTT nga anaa sa Trizol makaabli sa disulfide bond sa RNase, apan aduna gihapoy mga RNases, ilabi na sa mga sample sa tissue, busa pagtagad sa ubos nga temperatura.

1.Diha-diha dayon ituslob ang sample sa tisyu sa liquid nitrogen human kini makuha, o sa usa ka komersyal nga solusyon sa pagpreserba sa RNA.

2.Human makuha ang RNA sa sample sa selula, idugang kini sa lysis solution ug lyse kini sa ice box

3. Labing maayo nga gamiton ang liquid nitrogen para sa paggaling kung ang mga sampol sa tisyu homogenized.Sa diha nga ang paggamit sa usa ka electric homogenizer nga walay liquid nitrogen, pagtagad sa bug-os nga pre-cooling sa homogenate adapter.

Ang ikaduha mao ang exogenous DNase

1.Pag-armas sa hingpit, pagsul-ob og lab coat, pagsul-ob og maskara, ug siguruha nga magsul-ob og usa ka parisan sa bag-ong gwantes (ayaw kaayo pagdaginot!! Kinahanglan nga matikdan nga ang Trizol kay super corrosive, ug kini usab kusog kaayo pinaagi sa mga gwantis, busa ayaw pagpatulo sa imong mga kamot).

2.Ang tanang gigamit nga pipette tips, EP tubes, PCR tubes ug uban pang kagamitan kinahanglang de-RNase treated.Mahimo kini nga matumog sa 0.1% DEPC ug dayon i-pressure ubos sa taas nga presyur.Hatagi'g pagtagad ang operasyon sa usa ka fume hood.Ang lokal nga mga malupigon mahimong direktang makapalit og mga consumable alang sa pagtangtang sa mga enzyme.

PS: Tugoti ako sa pagsulti kanimo usa ka tapulan nga pamaagi.Bisan tuod ang taas nga temperatura ug taas nga presyur dili hingpit nga makatangtang sa RNase, kini magwagtang sa dakong bahin niini.Ang 2 ka beses nga taas nga temperatura ug taas nga presyur adunay maayo nga epekto, ug ang pagkuha sa RNA adunay gamay nga epekto.

3.Ang alkohol makahimo sa denature sa mga protina,busa ang lamesa sa pagkuha sa RNA mahimong mapahiran sa 75% nga alkohol , ug ang mga gwantis mahimo usab nga i-spray sa alkohol.

4.Ang katapusang RNA dissolving solution ug centrifuge tube kinahanglan usab nga de-RNase nga pagtratar.Ang tubig sa DEPC kay kasagarang gigamit nga RNA dissolving solution.Atong hisgotan ang hustong paagi sa pag-andam sa tubig sa DEPC (hinumdomi nga i-repackage ang komersyal nga DEPC kung mopalit ka niini)

Idugang ang DEPC sa ultrapure nga tubig sa 1:1000, pag-uyog og maayo, pasagdi nga mobarug sa tibuok gabii sa 37 ° C, ug sterilize sa 121 ° C ubos sa taas nga temperatura ug taas nga pressure sulod sa 15 minutos.Ang tubig sa DEPC mahimong tipigan sa -20°C sa 1ml nga aliquots.

Sa katapusan, sa pagsumada: ang ubos nga temperatura mao ang yawe, ang mga consumable maayo nga pagdumala, hingpit nga armado ug dili kaayo istorya!

Aw, kana alang sa estratehiya karon.Nanghinaut ko nga ang tanan nga konsentrasyon sa RNA ug kaputli nga imong gihisgutan.Parehong A260/A280 kay 2.0!!!

Siyempre, kung mogamit ka usa kaoperasyon sa temperatura sa kwarto RNA extraction kit, mahimong dili nimo masugatan ang mga problema sa ibabaw.

Ang operasyon sa temperatura sa lawak, nga walay pagdugang sa DNase, nagkuha sa kinatibuk-ang RNA gikan sa mga selula sulod sa 11 ka minutos, ug nagkuha sa kinatibuk-ang RNA gikan sa mga tisyu sa mananap o mga tanom sulod sa 30 minutos.

Para sa mga sample sa pagsulay, palihog kontaka:overseas@foregene.com

May Kalabutan nga mga Produkto:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/