(96-well) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – SYBR Green I
Mga paghulagway
Ang(96-maayo) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit–SYBR Green Inaghatagusa ka talagsaon nga lysis buffer systemto dali nga buhian ang RNAgikan sa kultura nga selulamga sampol alang sa mga reaksyon sa RT-qPCR, nga giwagtang ang pag-usik sa oras ug paghagoProseso sa pagputli sa RNA, ug mokabat lang ug 7 minuto aron makuha ang gikinahanglan nga template sa RNA.Ang5 × Direktang RT Mixug2× Direktang qPCR Mix-SYBRgihatag sa kahon dali ugepektibo nga makakuha sa real-time nga quantitativeMga resulta sa PCR.
5× Direct RT Mix ug 2× Direct qPCR Mix-SYBR adunay lig-on nga inhibitor tolerance, ug makagamit sa lysate sa sample nga sulayan isip template para sa episyente nga reverse transcription ug specific amplification.Ang reagent naglangkob sa Foregene nga talagsaon nga Reverse Transcriptase nga adunay taas nga kalambigitan sa RNA, ingon man ang Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2 , reaksyon buffer, PCR optimizer ug stabilizer, ug mahimong gamiton inubanan sa lysis buffer sa pag-ila sa sample sa madali, sayon ug tukma, ug kini adunay mga kinaiya sa taas nga pagkasensitibo, lig-on nga specificity ug maayo nga kalig-on.
Ang kit gitumong sa micro-system lysis sa 96-well cultured cells, ug adunay maayo nga pagkaparehas ug pagkamakanunayon;ang mga sangkap sa kit naghatag og 96 ka lysis reactions, 96 reverse transcription reactions ug 96×2 qPCR reactions, nga makasugat sa 96-well cells plate alang sa usa ka higayon nga paggamit, paglikay sa polusyon nga gipahinabo sa balik-balik nga pag-abli, pagyelo ug pagtunaw sa mga reagents ug ang pagkadaot sa performance sa reagent.
Mga sangkap sa kit
| Komposisyon sa kit ( 50 μL lysis system/20 μLRT sistema sa reaksyon / 20μL qPCR nga sistema sa reaksyon) | DRT-03011 | Sulti | |
| 96T | |||
| BahinI | BufferCL | 5 mL | CellLisis |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| Bahin II | DNAPanas | 100 μL | |
| 5 × Direktang RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Direktang qPCR Mix-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX Reference Dye | 400µL | ||
| RNase- LibreddH2 O | 1.7mL |
| |
| Mkada tuig | 1 piraso | 1 nga pag-alagad | |
*: Ang lysis reagent DNA Eraser gilakip sa Part II sa kit;Ang mga sangkap sa Cell Lysis, RT, ug qPCR mahimong mapalit nga gilain.
Mga bahin ug bentaha
■Yano ug epektibo : sa Cell Direct RT nga teknolohiya, ang mga sample sa RNA mahimong makuha sa 7 minuto lang.
■ Ang sample nga panginahanglan gamay ra, ingon ka ubos sa 10 ka mga selula ang mahimong masulayan.
■ Taas nga throughput: kini dali nga makamatikod sa RNA sa mga selula nga gi-culture sa 384, 96, 24, 12, 6-well plates.
■ Ang DNA Eraser dali nga makatangtang sa gipagawas nga mga genome, makapakunhod pag-ayo sa epekto sa sunod nga mga resulta sa eksperimento.
■ Ang na-optimize nga RT ug qPCR nga sistema naghimo sa duha ka lakang nga RT-PCR reverse transcription nga mas episyente ug mas espesipiko ang PCR, ug mas makasugakod sa RT-qPCR reaction inhibitors.
Aplikasyon sa kit
Kasangkaran sa aplikasyon: kultura nga mga selula.
- RNA nga gipagawas pinaagi sa sample lysis: magamit lamang sa RT-qPCR template niini nga kit.
- Ang kit mahimong gamiton alang sa mosunod nga mga katuyoan: gene expression analysis, verification sa siRNA-mediated gene silencing effect, drug screening, etc.
Pagtipig ug kinabuhi sa estante
Ang Part I niini nga kit kinahanglang tipigan sa 4℃;Part II kinahanglan nga gitipigan sa -20 ℃.
Ang Foregene Protease Plus II kinahanglang tipigan sa 4℃, ayaw pag-freeze sa -20 ℃.
Reagent 2×Direct qPCR Mix-Taqman kinahanglan tipigan sa -20℃sa kangitngit;kung gigamit kanunay, mahimo usab kini tipigan sa 4℃ alang sa hamubo nga pagtipig (gamiton sulod sa 10 ka adlaw).
Tinuod nga Panahon nga mga prinsipyo sa disenyo sa primer sa PCR
Ipasa ang Primer ug Reverse Primer
Para sa Real Time PCR, ang primerong disenyo importante kaayo.Ang mga primer may kalabotan sa pagkasigurado ug kaepektibo sa PCR amplification, ug mahimong gidisenyo nga may kalabotan sa mosunod nga mga prinsipyo:
- Panguna nga gitas-on: 18-30bp.
- GC sulod: 40-60%.
- Tm nga bili: Primer design software, sama sa Primer 5, makahatag sa Tm value sa primer.Ang mga kantidad sa Tm sa upstream ug downstream primers kinahanglan nga duol sa mahimo.Ang pormula sa pagkalkula sa Tm mahimo usab nga gamiton: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Sa paghimo sa PCR, ang usa ka temperatura nga ubos sa primer Tm nga kantidad nga 5 °C kasagarang gipili isip annealing temperature (ang katugbang nga pagtaas sa annealing temperature mahimong makadugang sa specificity sa PCR reaction).
- Mga Primer ug mga produkto sa PCR:
- Disenyo primer PCR amplification produkto gitas-on mao ang labing maayo nga 100-150bp.
- Ang mga primer sa disenyo sa sekondaryang bahin sa estruktura sa template kinahanglang likayan kutob sa mahimo.
- Likayi ang pagporma sa 2 o labaw pa nga komplementaryong base tali sa 3′ nga tumoy sa upstream ug downstream primers.
- Primer 3′ terminal base dili mahimong anaa sa 3 ka dugang nga sunod-sunod nga G o C.
- Ang mga primer mismo dili adunay mga komplementaryong istruktura, kung dili usa ka istruktura sa hairpin ang maporma, nga makaapekto sa PCR amplification.
- Ang ATCG kinahanglang iapod-apod nga parehas kutob sa mahimo sa primer sequence, ug ang 3′ terminal base kinahanglang likayan isip T.
Apendise1:Cell DirektaRT-qPCR Kit nga sangkapt suplemento nga pakete
1.Cell Lysis Solution
| Solusyon sa Cell Lysis | |||
| Mga sangkap sa kit (24-well lysis system / atabay) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| BahinAko | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BahinII | DNA eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Mga sangkap sa kit (20 μl nga sistema sa reaksyon) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Direktang RT Mix | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml × 2 |
| Pagsagol sa qPCR | ||
| Mga sangkap sa kit (20 μl nga sistema sa reaksyon) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × Direkta nga qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 20× ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
Mga Manwal sa Instruksyon:
