Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready One-step qRT-PCR Kits
Mga paghulagway
Kini nga kit naggamit sa usa ka talagsaon nga lysis buffer system nga dali nga makapagawas sa RNA gikan sa kultura nga mga sample sa selula alang sa mga reaksyon sa RT-qPCR, sa ingon mawagtang ang makahurot sa panahon ug hago nga proseso sa pagputli sa RNA.Ang template sa RNA mahimong makuha sa 7 minuto lang.Ang 5×Direktang RT Mix ug 2×Ang direktang qPCR Mix-SYBR nga mga reagents nga gihatag sa kit dali ug epektibong makakuha og real-time nga quantitative nga resulta sa PCR.
5×Direktang RT Mix ug 2×Direct qPCR Mix-SYBR adunay lig-on nga inhibitor tolerance, ug ang lysate sa mga sample mahimong gamiton ingon nga template alang sa RT-qPCR direkta.Kini nga kit naglangkob sa talagsaon nga RNA high-affinity nga Foregene reverse transcriptase, ug Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, reaction buffer, PCR optimizer ug stabilizer.
Mga detalye
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Mga sangkap sa kit
| Bahin I | Buffer CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| Bahin II | DNA eraser |
| 5 × Direktang RT Mix | |
| 2× Direktang qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX Reference Dye | |
| RNase-Free ddH2O | |
| Mga instruksyon | |
Mga bahin ug bentaha
■Yano ug epektibo : sa Cell Direct RT nga teknolohiya, ang mga sample sa RNA mahimong makuha sa 7 minuto lang.
■ Ang sample nga panginahanglan gamay ra, ingon ka ubos sa 10 ka mga selula ang mahimong masulayan.
■ Taas nga throughput: kini dali nga makamatikod sa RNA sa mga selula nga gi-culture sa 384, 96, 24, 12, 6-well plates.
■ Ang DNA Eraser dali nga makatangtang sa gipagawas nga mga genome, makapakunhod pag-ayo sa epekto sa sunod nga mga resulta sa eksperimento.
■ Ang na-optimize nga RT ug qPCR nga sistema naghimo sa duha ka lakang nga RT-PCR reverse transcription nga mas episyente ug mas espesipiko ang PCR, ug mas makasugakod sa RT-qPCR reaction inhibitors.
Aplikasyon sa kit
Kasangkaran sa aplikasyon: kultura nga mga selula.
- RNA nga gipagawas pinaagi sa sample lysis: magamit lamang sa RT-qPCR template niini nga kit.
- Ang kit mahimong gamiton alang sa mosunod nga mga katuyoan: gene expression analysis, verification sa siRNA-mediated gene silencing effect, drug screening, etc.
Diagram
Pagtipig ug kinabuhi sa estante
Part I niini nga kit kinahanglan nga tipigan sa 4 ℃;Part II kinahanglan nga gitipigan sa -20 ℃.
Ang Foregene Protease Plus II kinahanglang tipigan sa 4℃, ayaw pag-freeze sa -20 ℃.
Reagent 2×Direct qPCR Mix-SYBR kinahanglan nga tipigan sa -20℃sa kangitngit;kung gigamit kanunay, mahimo usab kini tipigan sa 4℃ alang sa hamubo nga pagtipig (gamiton sulod sa 10 ka adlaw).
Tinuod nga Panahon nga mga prinsipyo sa disenyo sa primer sa PCR
Ipasa ang Primer ug Reverse Primer
Para sa Real Time PCR, ang primerong disenyo importante kaayo.Ang mga primer may kalabotan sa pagkasigurado ug kaepektibo sa PCR amplification, ug mahimong gidisenyo nga may kalabotan sa mosunod nga mga prinsipyo:
Panguna nga gitas-on: 18-30bp.
GC sulod: 40-60%.
Tm nga bili: Primer design software, sama sa Primer 5, makahatag sa Tm value sa primer.Ang mga kantidad sa Tm sa upstream ug downstream primers kinahanglan nga duol sa mahimo.Ang pormula sa pagkalkula sa Tm mahimo usab nga gamiton: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Sa paghimo sa PCR, ang usa ka temperatura nga ubos sa primer Tm nga kantidad nga 5 °C kasagarang gipili isip annealing temperature (ang katugbang nga pagtaas sa annealing temperature mahimong makadugang sa specificity sa PCR reaction).
Mga Primer ug mga produkto sa PCR:
Disenyo primer PCR amplification produkto gitas-on mao ang labing maayo nga 100-150bp.
Ang mga primer sa disenyo sa sekondaryang bahin sa estruktura sa template kinahanglang likayan kutob sa mahimo.
Likayi ang pagporma sa 2 o labaw pa nga komplementaryong base tali sa 3′ nga tumoy sa upstream ug downstream primers.
Primer 3′ terminal base dili mahimong anaa sa 3 ka dugang nga sunod-sunod nga G o C.
Ang mga primer mismo dili adunay mga komplementaryong istruktura, kung dili usa ka istruktura sa hairpin ang maporma, nga makaapekto sa PCR amplification.
Ang ATCG kinahanglang iapod-apod nga parehas kutob sa mahimo sa primer sequence, ug ang 3′ terminal base kinahanglang likayan isip T.
Apendise 1: Cell Direct RT-qPCR Kit component supplement pack
1.Solusyon sa Cell Lysis
|
| |||
| Mga sangkap sa kit (24-well lysis system / atabay) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| BahinAko | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BahinII | DNA eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
2. RT Mix
|
| |
| Mga sangkap sa kit (20 μl nga sistema sa reaksyon) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Direktang RT Mix | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml × 2 |
|
| ||
| Mga sangkap sa kit (20 μl nga sistema sa reaksyon) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direktang qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 50× ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
Mga Manwal sa Instruksyon:
