Escherichia coli O157:H7 Nucleic Acid Detection Kit (PCR Fluorescent Probe Method)
Deskripsyon sa Kit:
Cat.No.FP102
Gigamit kini alang sa paspas nga pagkakita ug pag-screen sa E. coli O157:H7 sa pagkaon, feed, mga sample sa tubig ug mga sample sa kinaiyahan.
Mga paghulagway
Gigamit kini alang sa paspas nga pag-ila ug pag-screen sa E. coli O157:H7 sa pagkaon, feed, mga sample sa tubig ug mga sample sa kinaiyahan.
[Prinsipyo sa pagsulay]Sumala sa prinsipyo sa fluorescent PCR nga teknolohiya, ang piho nga mga primera ug Taqman probes gidisenyo alang sa espesipikong gene sa Escherichia coli O157: H7, ug namatikdan sa usa ka fluorescent PCR nga instrumento, aron makaamgo sa pagkakita sa Escherichia coli O157: H7 Qualitative detection sa DNA.
Mga sulud sa Kit
Mubo nga sulat: Ang ROX channel probe wala gilakip.
| Cmga omponent | Espesipikasyon | Qgidaghanon |
| Buffer A | tubo | 1 |
| Buffer B | tubo | 1 |
| Positibo nga pagkontrol | tubo | 1 |
| Negatibo nga pagkontrol | tubo | 1 |
Gipaabot nga Paggamit
Kini gigamit alang sa paspas nga pagkakita ug pag-screen sa E. coli O157:H7 sa pagkaon, feed, mga sample sa tubig ug mga sample sa kinaiyahan.
Mga Kondisyon sa Pagtipig Ug Petsa sa Pag-expire
Tipigi sa -20 ℃ sa ngitngit ug likayan ang balikbalik nga pagyelo ug pagtunaw.
Ang validity period kay 12bulan, ug ang petsa sa produksiyon gipakita sa gawas nga pakete.
Mga Instrumento Ug Magamit
Fluorescent quantitative PCR instrument, pipette gun ug matching tips, vortex shaker, mini centrifuge.
Paggamit
1. Pagproseso sa Sampol
1.1 Sample type: Kini nga kit angay alang sa pagkaon, feed, sample sa tubig ug uban pang mga sample nga gidudahang kontaminado sa Escherichia coli O157:H7.Alang sa mga produkto nga giproseso sa lawom nga karne, mga ilimnon ug uban pang mga sangkap nga adunay mga pigment, kinahanglan kini hugasan aron malikayan ang pag-impluwensya sa pagkolekta sa signal sa fluorescence.
1.2 Pagproseso sa sample: Tan-awa ang "GB 4789.10-2016 Food Safety National Standard Food Microbiological Examination sa Escherichia coli O157: H7 Test" alang sa pag-andam sa sample, kultura sa pagpalambo ug pag-inusara sa Escherichia coli O157: H7.
- Npagkuha sa ucleic acid
Pagdala og 20 mL nga enrichment solution sa 1.5 mL centrifuge tube, idugang ang 200 μL nga microbial lysate (dugang kit ang gikinahanglan), vortex sulod sa 30 segundos, centrifuge kadiyot, ug ilain.
Mga komento: Ang pagkuha sa nucleic acid gikan sa lysate kinahanglan nga makompleto sa sulod sa 10 minuto, ug dili mahimong tipigan sa dugay nga panahon.
3. Pagpadako sa Nucleic Acid
3.1 I-on ang fluorescent quantitative PCR instrument para magamit.
Buffer A ug Buffer B gikan sa kit, tunawon kini pag-ayo, ug isentro sa kadali.Idugang ang 18 μL Buffer A ug 2 μL Buffer B sa matag PCR reaction tube.Dayon idugang ang 5 mL matag negatibo nga kontrol, gikuha nga nucleic acid, ug positibo nga kontrol ngadto sa PCR reaction tubes, takpan ang mga tubo, ug centrifuge sa makadiyot.
3.3 Ibalhin ang PCR reaction tube ngadto sa fluorescent PCR machine, ug gamita ang mosunod nga mga pamaagi sa paghimo sa amplification experiments: pagpili og 25 mL para sa reaction system, pagkolekta og fluorescence signal sa 60°C para sa matag cycle, ug pilia ang FAM para sa detection channel.
| Lakang | Programa | Gidaghanon sa mga siklo |
| 1 | 37 ℃ 5 min | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60 ℃ 30s (pagkolekta fluorescence) |
Mga giya alang sa pagtuki sa mga problema
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Walay RNA nga makuha o ubos ang ani sa nucleic acid
Kasagaran adunay daghang mga hinungdan nga makaapekto sa pagkaayo sa pagkaayo, sama sa: sample nga sulud sa RNA, pamaagi sa operasyon, gidaghanon sa elution, ug uban pa.
Pag-analisar sa kasagarang mga hinungdan:
1.Ice bath o ubos nga temperatura (4 ° C) centrifugation sa panahon sa operasyon.
Sugyot: Ang temperatura sa kwarto (15-25 ° C) nga operasyon, dili ice bath ug ubos nga temperatura centrifuge.
2. Dili husto nga pagtipig sa sample o pagtipig sa sample sa dugay nga panahon.
Sugyot: Tipigi ang mga sample sa -80 ° C o i-freeze sa liquid nitrogen, ug likayi ang balikbalik nga paggamit sa freeze-thaw;sulayi ang paggamit sa bag-ong nakolekta nga mga sample para sa RNA extraction.
3.Dili igo nga sample lysis
Rekomendasyon: Palihug siguruha nga ang sample ug ang nagtrabaho nga solusyon (Linear Acrylamide) hingpit nga gisagol ug gilumlom sa 10 min sa temperatura sa kwarto (15-25 ° C)
4. Ang eluent gidugang nga sayop
Rekomendasyon: Siguroha nga ang RNase-Free ddH2O idugang sa tunga sa lamad sa kolum sa pagputli
5. Dili husto nga gidaghanon sa anhydrous ethanol sa Buffer viRW2
Sugyot: Palihug sunda ang mga instruksyon, idugang ang husto nga gidaghanon sa anhydrous ethanol sa Buffer viRW2 ug isagol kini og maayo sa dili pa gamiton ang kit.
6. Dili husto nga paggamit sa sample.
Sugyot: 200μl nga sample kada 500μl sa Buffer viRL.Ang sobra nga sample volume moresulta sa pagkunhod sa RNA extraction rate.
7. Dili husto nga elution volume o dili kompleto nga elution.
Sugyot: Ang eluent volume sa purification column mao ang 30-50μl;kung ang epekto sa elution dili makatagbaw, girekomenda nga idugang ang pre-heated RNase-Free ddH2O ug i-extend ang oras nga pagbutang sa temperatura sa kwarto, sama sa 5-10min
8.Purification kolum adunay ethanol residue human sa rinsing sa Buffer viRW2.
Sugyot: Kung ang ethanol magpabilin gihapon human sa paghugas sa Buffer viRW2 ug empty-tube centrifugation sulod sa 2min, ang purification column mahimong ibilin sa room temperature sulod sa 5min human sa empty-tube centrifugation aron hingpit nga makuha ang nahabilin nga ethanol.
Ang pagkadaot sa giputli nga mga molekula sa RNA
Ang kalidad sa giputli nga RNA adunay kalabotan sa mga hinungdan sama sa pagtipig sa sample, kontaminasyon sa RNase, ug operasyon.
Pag-analisar sa kasagarang mga hinungdan:
1.Ang nakolekta nga mga sampol wala maluwas sa oras.
Sugyot: Kung ang sample dili gamiton sa oras human sa pagkolekta, palihug ibutang kini sa -80 ℃ o liquid nitrogen diha-diha dayon.Alang sa pagkuha sa mga molekula sa RNA, sulayi ang paggamit sa bag-ong nakolekta nga mga sampol kung mahimo.
2. Ang mga nakolekta nga sample nagyelo ug balik-balik nga natunaw.
Sugyot: Likayi ang balikbalik nga pagyelo ug pagtunaw (dili mosobra sa kausa) panahon sa pagkolekta ug pagtipig sa sampol, kay kon dili ang abot sa nucleic acid mokunhod.
3. Ang RNase gipaila sa operating room o walay disposable gloves, maskara, ug uban pa ang gisul-ob.
Sugyot: Ang pagkuha sa mga molekula sa RNA nga eksperimento labing maayo nga gihimo sa usa ka bulag nga RNA operation room, ug ang eksperimento nga lamesa gilimpyohan sa wala pa ang eksperimento.Pagsul-ob ug disposable gloves ug maskara sa panahon sa eksperimento aron malikayan ang pagkadaot sa RNA tungod sa pagpaila sa RNase.
4.Ang reagent kontaminado sa RNase sa panahon sa paggamit.
Sugyot: Ilisan ug bag-ong Viral RNA Isolation Kit para sa may kalabutan nga mga eksperimento.
5.Ang kontaminasyon sa RNase sa centrifuge tubes, pipette tips, ug uban pa. Sugyot: Siguroa nga ang centrifuge tubes, pipette tips, ug pipettes tanan RNase-Free.
Ang giputli nga mga molekula sa RNA nakaapekto sa mga eksperimento sa ubos
Ang mga molekula sa RNA nga giputli sa kolum sa pagputli makaapekto sa mga eksperimento sa ubos kung adunay sobra nga mga ion o protina, sama sa: reverse transcription, Northern Blot, ug uban pa.
1.Adunay nahabilin nga mga ion sa asin sa mga eluted RNA molekula.
Rekomendasyon: Siguruha nga ang husto nga gidaghanon sa anhydrous ethanol gidugang sa Buffer viRW2, ug hugasi ang kolum sa pagputli sa makaduha sumala sa husto nga katulin sa centrifugation sa mga panudlo sa pag-opera; Kung adunay nahabilin nga mga ion sa asin, mahimo nimong idugang ang Buffer viRW2 sa kolum sa pagputli, ug ibilin kini sa temperatura sa kwarto sa 5min.Dayon paghimo sa centrifugation aron makuha ang kontaminasyon sa asin sa labing dako nga gidak-on
2. Adunay nahabilin nga ethanol sa eluted RNA molekula
Sugyot: sa higayon nga mapamatud-an nga ang mga kolum sa pagputli nahugasan na sa Buffer viRW2, himoa nga walay sulod nga tubo nga centrifugation sumala sa centrifugal speed sa mga instruksiyon sa pag-opera.Kung adunay nahabilin nga ethanol, mahimo kini ibilin sa 5 minuto sa temperatura sa kwarto pagkahuman sa usa ka centrifugation nga walay sulod nga tubo aron makuha ang nahabilin nga ethanol sa labing kadako.
Mga Manwal sa Instruksyon:
Manwal sa Instruksyon sa Viral RNA Isolation Kit
