Direkta nga RT-qPCR Kit
Deskripsyon
Ang Direct RT-qPCR Kit naghatag og gilain nga giputos nga RT-qPCR buffer ug taas nga episyente nga enzymesagol (Taq, M-MLV, RI), nga naghimo niini nga sayon alang sa pagmugna sa back-end kits ug sistemaadjustment, sulod sa yano nga pag-verify.
Mga detalye
500T, 50,000T
Mga sangkap sa kit
Mga sulod sa kit (20 μL nga sistema sa reaksyon) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
500 T | 50,000 T | |
Direkta nga Sagol nga Enzyme | 500 μL×1 | 50 mL×1 |
2× Direktang RT-qPCR Buffer | 1 mL×5 | 500 mL×1 |
Instruksyon | 1 | 1 |
Mga Lakang sa Pag-opera
Sa wala pa ang pag-andam sa reagent, ang tanan nga mga reagents sa kit kinahanglan nga matunaw sa temperatura sa kwarto ug hinayhinay nga isagol.
A: Pangandam of template ug reagent
1. Pag-andam ug giandam nga RNA template (Girekomendar nga gamiton ang Foregene Total RNA Isolation Kit series kit aron makuha ug putli ang RNA template) o sample cracking product (Girekomenda nga gamiton ang Foregene Lysis system), piho nga primers(10 μM) ug uban pang may kalabutan nga mga gamit, instrumento.
2. Ibutang ang 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O ug 20× ROX Reference Dye(kung kini's gikinahanglan) sa kahon nga adunay yelo, paghimo niini nga natural nga matunaw, ug hinayhinay nga gisagol.
B: Pangandam of RT-qPCR sistema
Lamesa 1 : Pangandam of RT-qPCR system
Component | Tomo | Katapusan nga konsentrasyon |
2× Direktang RT-qPCR Buffer | 10 μL | 1 × |
Direkta nga Sagol nga Enzyme | 1μL | |
Ipasa nga Primer(10 μM) | 0.8 μl | 50-900nM |
Baliktad nga Primer(10 μM) | 0.8 μl | 50-900nM |
Probe(4 μM) | 1μL | 200nM |
Template(RNA o Lysate) | X μL | |
20×ROX Reference Dye | - | 1* |
RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
Kinatibuk-ang Tomo | 20μL |
C: Gitakda ang RT-qPCR reaksyon programa
Lamesa 2 : RT-qPCR reaksyonon programa setting (kay pananglitan: duha-lakang pamaagi)
Lakang | Temperatura | Panahon | Mga siklo | Kontento | |
1 | 50 ℃ | 15 min | 1* | 1 | Balikbalik nga transkripsyon |
2 | 95 ℃ | 1 min | 1 | Pre-denaturasyon | |
3 | 95 ℃ | 10 ka seg | 40-45 | Denaturasyon | |
60 ℃ | 30 ka segundo 2* | Anneal/Extension |
Pagtipig ug kinabuhi sa estante
-Ang kit kinahanglan nga tipigan sa -20± 5℃.Ang validity period kay 12 ka bulan.
-Likayi ang balikbalik nga freeze-thaw cycle (<5 cycles).